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各位同学好
今天我们来学习一下颗粒细胞的培养与应用
主要包括以下内容
颗粒细胞的功能
颗粒细胞体外培养与鉴定
颗粒细胞培养的注意事项 用途及局限性等
首先来看颗粒细胞的功能
颗粒细胞位于卵母细胞的周围
能够分泌多种生物活性物质
包括生长因子
激素等促进卵母细胞的生长发育
反之
卵母细胞分泌的因子对于颗粒细胞的生长
分化以及代谢等也具有调控作用
因此颗粒细胞与卵母细胞能够相互调控
共同维持卵泡的正常生长 发育与成熟
在卵泡发育过程中
颗粒细胞一直处于动态变化之中
其增殖 分化 代谢等功能状态
与卵泡发育阶段密切相关
为了深入研究卵泡发育过程中
颗粒细胞的生殖内分泌调控机制
人们建立了颗粒细胞体外培养体系
发育至不同阶段的颗粒细胞
都可以进行体外培养
例如
可以从出生后12天小鼠的卵巢机械分离出窦前卵泡
然后进一步消化分离颗粒细胞进行体外培养
比较常用的方法是
给出生后3周的小鼠
注射孕马血清促性腺激素（PMSG）
促进卵泡发育和颗粒细胞增殖
24到48小时后取卵巢
通过针刺卵泡的方式释放出颗粒细胞
离心洗涤
接种后进行体外培养
另外
在辅助生殖技术过程中得到的
人卵丘颗粒细胞和壁层黄素化颗粒细胞
也可以进行体外培养
通常采用的培养液为
DMEM/F12添加5%的胎牛血清和1%的青/链霉素
培养条件为5%CO₂和37℃细胞培养箱
体外培养的颗粒细胞生长增殖后可以进行传代
而且可以通过免疫荧光染色
检测FOXL2 FSHR等蛋白的表达
对颗粒细胞进行鉴定
在体内
颗粒细胞发育到一定阶段开始表达促性腺激素受体
其中卵泡刺激素受体（FSHR）
介导FSH促进颗粒细胞增殖
分化和雌激素合成等作用
体外颗粒细胞培养时可以直接添加FSH
或者加入腺苷酸环化酶激活剂
弗司扣林（forskolin）模拟FSH的作用
随着卵泡的发育
在FSH作用下
窦卵泡的颗粒细胞开始表达黄体生成素的受体（LHR）
介导LH的促黄素化作用
在体外培养的颗粒细胞中同时加入弗司扣林和佛波酯
可以模拟LH峰的作用
目前人们已经建立了多种人颗粒细胞系
它们的发育阶段和性质有所不同
可以用来研究颗粒细胞不同的生物学功能
如KGN细胞具有未成熟颗粒细胞的特征
表达FSHR
能够合成雌激素
但是来源于肿瘤细胞
而SVOG则是通过转染SV40大T抗原
永生化的人黄素化颗粒细胞
可以合成孕激素
颗粒细胞培养的注意事项包括
一 由于常用的基础培养基中含有酚红作为酸碱指示剂
而酚红具有类似雌激素的作用
因此为避免酚红对颗粒细胞的影响
有时需要应用无酚红培养基
二 为减少血清中多种激素和
生长因子对颗粒细胞功能的影响
可以用碳吸附胎牛血清进行培养
三 颗粒细胞合成雌激素需要雄激素作为底物
而颗粒细胞自身不能合成雄激素
因此当研究颗粒细胞雌激素合成功能时
通常在培养液中加入睾酮
四 体外培养的颗粒细胞由于失去了卵母细胞
膜间质细胞分泌因子以及卵巢内微环境的调控
有自发黄素化的倾向
故体外培养时间不能太长
下面讲一下颗粒细胞培养的用途
通过对不同发育阶段的颗粒细胞进行体外培养及干预
可以比较方便地研究颗粒细胞的
增殖 凋亡 分化 能量代谢以及
雌孕激素合成分泌等功能
对于揭示卵泡发育过程中
颗粒细胞的生殖内分泌调控
分子机制具有重要意义
最后 来看一下颗粒细胞培养的局限性
体外培养时间短
失去了促性腺激素的周期性调控
也失去了来自卵母细胞和膜间质细胞的调控
无法模拟卵泡发育过程中颗粒细胞的动态生理变化
总结一下
本节我们主要介绍了
卵巢颗粒细胞培养的方法 应用以及局限性
大家可以根据研究目的进行选择
谢谢大家
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