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2003年爆发的非典

给实验室工作人员敲响了警钟

实验室生物安全防护问题

日益得到了人重视

今天为大家讲述

实验室生物安全防护

及生物安全柜

下面我们来看一些案例

首例实验室感染发生于1826年

是听诊器发明者

法国医生雷奈克

他在接触结核病患者的椎骨后

食指感染皮肤结核

首例实验室感染死亡病例

发生于1849年

是维也纳的一名医生

他在解剖因患产褥

败血症死亡病例时

划破手指而感染发病死亡

防止实验室感染

及其导致的生物危害

重在生物安全防护

那么什么是生物安全防护

首先我们来了解一下

生物安全概念的提出背景

1956年英国科学家克里克

和美国科学家沃森

揭示了DNA的结构

于1962年分享了诺贝尔奖金

1968年美国科学家伯格

成功地将两段没有遗传

相关性的DNA片段连接

随后他试图将这段重组

脱氧核糖核酸

导入真核生物细胞核

由于实验室采用的DNA

来源于一种非常危险的病毒

一旦DNA片段

在真核细胞内恢复了生物活性

后果将不堪设想

伯格在仔细斟酌后

出于生物安全的考虑

放弃了这一项

可能让他问鼎诺贝尔奖的实验

1972年美国生物学家伯耶

从大肠杆菌中

提取了一种限制性内切酶

EcoRI酶

这种酶能够在特定编码区域

将DNA链切断

这使得不同遗传物质之间的重组

变的愈加可行

科学家们再次考虑到

生物实验的安全性问题

于1975年

召开了著名的阿西罗玛会议

专门讨论生物安全问题

在阿西罗玛会议召开不久

美国国立卫生研究院

就制定了世界上第一部

专门针对生物安全的规范性文件

及NIH实验室操作规范

第一次提到了生物安全的概念

美国于1976年

按照对生物危害防护的不同程度

将实验室分为四个等级

也就是所谓的P1 P2 P3 P4实验室

这里的P

表示物理隔离或者物理防护

Physical containment

随后经过数次修改

于1993年开始改用BSL制度

即生物安全水平实验室

也将其分为相应的四个等级

在实验室安全管理方面

也有不同的文件出台

如WHO1983年发布的

试验生物安全手册被广泛使用

2004年第三版公布

我国首个实验室生物安全国家标准

实验室生物安全通用要求

也于2004年正式发布实施

生物安全防护的目的

和内容是什么呢

我们先看一下

生物安全防护的目的

生物安全防护

分为一级防护和二级防护

一级防护指的是

个体防护加安全设备

它的目标是保护实验人员

和室内环境免遭污染

二级防护指的是个体防护

加安全设备加硬件设施

它的目的是保护实验人员

和室内室外环境免遭污染

刚才所提个体防护

如个人防护服 防毒面具

安全眼镜和眼罩 手套等

而安全设备主要是生物安全柜

目前分为三个等级

而安全设施

指的是生物安全实验室水平分级

目前分为四级

下面是一些因个体防护不当

导致病原微生物感染的案例

2003年中国台湾

某病毒实验室的研究人员

在操作过程中

因为未戴手套

清理运输箱内的废物时

感染了SARS病毒

生物安全柜

是处理危险微生物时

所用的箱型空气净化安全装置

它的分型有一级二级三级

实验室使用生物安全柜的基本要求是

一般实验室常用的洁净工作台

不等于生物安全柜

为了维护安全柜的正常运行

必须定期检查高效过滤器

是否堵塞 泄漏 风量及平衡的情况

以及报警装置的情况

为了对柜内的污染充分稀释

并保证下次正常运转

在操作完毕后至少要空转15分钟

生物安全柜的总要求有以下几点

一 前面开口部位

要使受试材料器具等

通过前面开口的次数最少

在操作开始前

就要将必要的器具材料

放在适当的位置

人步行的速度要减慢于每秒一米

二 吸附垫

在操作台上

放上有吸附材料的塑料薄膜

每次更换

三 实验物品的放置位置

所有物品

应尽可能的放在工作台后部

靠近工作台边缘的位置

并使其在操作中

不会阻挡候补隔散

可产生气溶胶的设备

如混匀器 离心机等

应靠近安全柜的后部放置

有生物危害性的废弃物袋

盛放废弃吸管的盘子

以及吸滤瓶等体积较大的物品

应放在安全柜的某一侧

在工作台面上设置污染区洁净区

和工作区

移动物品时

应遵循从洁净区

向污染区移动的原则

污染区的物品不得离开污染区

四 柜内操作规定

在安全柜内不得使用明火

柜内尽量不用火焰消毒

可使用红外电热接种环灭菌气

尽量不要使用振荡器

或离心机等设备

柜内使用的瓶子不要用橡胶塞

而用螺旋盖

柜内物品

应该尽量呈横向一字摆放

避免交叉污染

避免进行会干扰气流的动作

移动手臂时缓慢进行

避免在前窗开口处

快速挥动手臂等动作

避免挡住进气口

和回流气流通道

手臂不要放在气格

在操作过程中

不要阻挡后部隔栅上

每次使用完后

用清洁剂清洗前窗

五 生物安全柜的清洁和消毒

在每次使用前后

要使用可杀灭安全柜内

任何微生物的消毒剂

清除生物安全柜内表面的污染

包括工作台面四周

以及玻璃的内外侧

实验结束时

包括仪器设备在内的

生物安全柜内的所有物品

应清除表面污染并移出安全柜

在对目标生物体消毒时

可以采用漂白剂溶液

或75%的酒精来消毒

在使用如漂白剂等

腐蚀性消毒剂后

还必须用无菌水再次进行擦拭

六 溢出物的处理

实验室要张贴如何处理

溢出物的实验室操作规则

每一位使用实验室的成员

都要阅读并理解这些规程

一旦在生物安全柜中

发生有生物危害物品的溢出

应在生物安全柜处于工作状态下

立即进行清理

使用有效的消毒剂

并在处理过程中

尽可能减少气溶剂的生成

所有接触溢出物的材料

都要进行消毒或高压灭菌

七 柜内实验器材和材料的取出

在实验中或完毕后

必须从安全柜中取出

非灭活的病原体时

应装好放在药液槽中

使容器外侧被消毒后方可取出

安全柜内应配置

回收污染物的容器

容器中必须配有消毒液

将污染物完全浸没

这些回收容器

每天操作完毕后盖好

以防止污染

再次使用时需要重新配置消毒液

凡生物安全实验室的

废弃的污染材料

使用过的包装材料 容器 纸张等

废弃物都要装好

或者经高压灭菌处理后

拿到缓冲区

八 使用生物安全柜时

应穿个体防护服

一 在进行生物安全水平一级

和生物安全水平二级

实验室操作时

可穿普通实验服

二 在生物安全水平三

和生物安全水平四实验室操作时

应穿前边加固处理的

反背式实验隔离衣

手套应套在隔离衣外面

可以戴加有松紧带的套袖

来保护研究人员的手腕

三 有些操作可能还需要

戴口罩和安全眼镜

风险是绝对的

安全是相对的

虽然实验室的安全隐患复杂多样

但是我们应该严格遵守管理规定

严格遵守操作规程

尽量避免意外的发生

下节课将为大家讲述

生物实验室的分类