当前课程知识点:食品微生物及其安全控制 > 任务五 微生物分离纯化技术 > 5-1 微生物涂布技术 > 微生物涂布技术
微生物学实验中的一种操作方法
由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中
再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡
而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌
因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长
因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法
本节课主要介绍一下微生物的涂布平板分离法
教学目标
一、掌握倒平板技术,熟悉系列稀释原理
二、熟练运用涂布平板法进行分离微生物
教学重点、难点
涂布平板技术
涂布平板法做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿,制成无菌平板
冷却凝固后,将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面
再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面
经培养后挑取单个菌落
优点是可以计数,可以观察菌落特征,操作相对简单
是较常使用的常规方法
缺点是吸收量较少
平板不干燥效果不好,容易蔓延
有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开
进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意
否则不易得到准确的结果
二、涂布平板分离操作
一、物品的准备
首先用百分之七十五的酒精
对手及镊子
桌面进行消毒
点燃酒精灯
分别在三个九毫升的无菌水上
标注十的负一、十的负二、十的负三
取六套灭菌平皿
二、样品的稀释
用灭菌移液管准确量取牛奶样品一毫升
放入装有九毫升标注十的负一次方无菌水的试管中
用手充分振荡,使微生物细胞分散
即制成十的负1次方稀释液
再换用一只一毫升无菌吸管
吸取十的负一次方稀释液一毫升
移入装有九毫升标注十的负二次方无菌水的试管中
充分震荡使菌液混合均匀
即制成十的负二次方稀释液
再换一支无菌吸管
吸取十的负二次方稀释液一毫升
移入装有九毫升标注十的负三次方无菌水的试管中
即制成十的负三次方稀释液
三、制作平板及涂布
取融化至四十六摄氏度左右的营养琼脂培养基
在六个培养皿中分别倒入十五毫升
静置待冷却凝固后备用
分别标注两个十的负一
两个十的负二
两个十的负三
用无菌吸管分别由十的负三、十的负二、十的负一次方
三个样品稀释液中各吸取零点二毫升
对号放入已写好稀释度的平板中
用无菌玻璃涂棒涂布
右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上
将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展
使之分布均匀
室温下静置五到十分钟
使样品进入培养基中
四、保温培养
将平板倒置于三十六摄氏度的恒温培养箱中
培养二十四到四十八小时,即可出现菌落
五、实验结果
样品稀释适当浓度,就可分离得到单个菌落
三、注意事项
菌液要全部滴上,如吸管尖端有剩余
可将吸管在培养基表面轻轻的按一下即可
二、涂布时,先按一条线轻轻的来回推动
使样液分布均匀,然后再按其垂直方向来回推动
平板边缘可弧线推动
三、整个操作过程要注意无菌操作
本节课内容就到这里,谢谢大家
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--放线菌
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--霉菌
--霉菌
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--病毒
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--显微镜的使用
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