1.2 组织学的研究方法（上）在线视频

上面我们讲了

组织学的基本的概念

那么下面

我们来给大家讲

组织学的基本的研究的方法

就我们这个学科

是用什么样的方法研究的

刚才我给大家讲组织学

是一门经验性的学科

这门经验性的学科

过去传统上

我们是基于解剖来产生的

基于解剖学来产生的

那么在这个研究的方法上

我们还主要是以观察为主

那么要观察

我们组织学最重要的一个方法

就是要进行样本的制备

也就是能够取得所观察的样本

也就是能够取得所观察的样本

那么取得观察的样本

目前的我们有各种各样的方法

能够从人体上或者动物体上

取到我们要观察的样本

或者说我们叫做组织块

那么这样的话

我们就有一系列的取样的方法

下面

我们就给大家分别讲一讲

这些取样的方法

首先

这个取样的方法可以是活体的

也可以是在尸体上进行取样的

所以我们活体上的取样

我们把它叫做活检

那么也就是通过一种快速安全的一种方法

从人体的各个组织当中

取得我们所要观察的样本

那么这个方法

有好多种

比如说我们说的首先一个

就想到手术刀

这个手术刀

我们说可以直接的

这个取样的组织包括了什么

皮肤口腔鼻子等

这个很直接

很容易取到

另外

还有一些方法

是我们经常用的就是穿刺进行穿刺

那么这些是一个实质性的一些器官

比如说我们的脑眼睛

甲状腺

淋巴结

乳腺还有这个内脏

包括肺胸膜

肝脏

肾脏

包括一些骨骼和这个脊髓

睾丸骨骼肌等等

这些都可以是用穿刺的方法来进行取样

那么还有一些组织

我们可以通过内窥镜来进行取样

比如说我们的消化道还有些体腔

这个女性的生殖系统

我们都可以用内窥镜来进行取样

我们还有

通过这个沿血管的一些特殊的

柔性的这个管道

我们通过这个上去可以取样

比如说我们也可以到肝脏里面

通过血管里面我也可以进行取样

那么这些都是一些不同的一些取样的方法

我们取得了这些组织的样本以后

下一个步骤

就是要对这些样本进行加工

并不是说我们取得的样本

马上放到显微镜下面

我们就能观察到的

而是要对这些样本进行适当的处理

加工

处理加工以后

才能对这些样本进行观察

那么目前呢

我们说

对于我们组织学来说

我们形成了一个很好的加工

取样的一个系统的就是进行切片

我们把组织块

这个取下来以后

在这个切片机上切的很薄很薄

然后

就可以在显微镜下观察

那么同学们马上就要问

我如何来切片如何来制片

那么这个就是我们马上要给大家讲的

这个内容

拿到组织样本以后

我们首先第一步

要把这个组织的进行固定

大家想着

如果这个组织不固定的时候

你很难去切

所以我们首先是固定

那么这个固定它主要是避免这个组织损伤

避免组织损伤

大家知道这个组织的如果你放出来

如果不进行固定处理

这个组织

就自溶现象

甚至还有一些微生物

会腐烂啊

那么如果这样的话

我们随着时间的延长

我们的这个组织块

就会失去了它的原来的结构

就达不到观察的目的

所以我们必须把它固定起来

保持组织的结构和分子组成不变

那么这个固定的方法

现在有各种各样

那么我们首先来给大家讲

就是用化学的方法可以固定

那么

除了化学的方法以外

物理的方法也可以固定

先看一下化学方法

化学方法

主要我们用的是固定剂

那么这个固定剂也叫稳定剂或者叫交联剂

它能够把这个小的组织

当中的小的分子交联在一起

从而形成一个完整的一个结构

那么在这种固定的时候

对于组织来说

可以是把组织切下来

切成小片来进行固定

那么也可以

是在活体的时候

把这些固定剂或者交联剂

给它注入到动物或者人体里面

然后注入进去以后

在体内固定

然后我们在去取样

所以这就是取样和固定之间的一个关系

我们也可以先体验后固定

也可以先固定在取样

所以这是

根据我们实践当中不同的研究来决定

我们如何去固定

那么第二个方法

就是物理性的方法

物理性的方法

我们最常用的就是用微波炉

进行固定

那么微波炉固定的时候

这个能量的设置哪是非常重要

要测试不同的时间

那么对于固定来说

我们最重要的是要选好固定剂

那么常用的固定剂是福尔马林固定剂

也就是37%的甲醛

做的缓冲液把进行固定

另外

还有戊二醛也可以做固定剂

这两种固定剂

都能够适应于将来光学显微镜

观察所需要的这个样本

所以这是我们组织学上

最常用的两种固定的方法

那么为了这个达到高分辨的效果

有时候

我们用了电子显微镜

那么对电子显微镜的样本

我们固定的时候

就要用戊二醛缓冲液

或者四氧化锇缓冲液进行固定

这个目前在我们教学上用的比较少

你们将来研究的时候

可能会用电子显微镜会用的多

所以这是第一步

我们说选择的样本进行固定

我们有不同的固定剂

那么下一步

我们把这个样本固定好

就要进行一个处理

处理的第一步

就要进行脱水

这个脱水

我们说

这个组织里面大多数是水

而固体物占的比例比较少

但是如果你把水要全部脱掉以后

这个组织呢就会发生变形

所以我们在脱水的时候

一定要让组织这种形态的不能改变

那么

为了做到这一点

采取的什么办法

我们采取了叫做逐级脱水的办法

所以逐级脱水办法

我们用了乙醇这个很好的溶剂

跟水的不同的比例来进行脱水

只是我们首先得用到70%的乙醇

大家知道70%的乙醇

它有30%的是水

所以这个加进去以后

70%的乙醇代替70%的水

对于组织来说是一个可以接受的变化范围

那么这样的话

组织不会变形

等组织在这个情况下

在这种环境下适应以后

我们再把它换成80%的酒精乙醇

80%酒精处理以后

我们把它转换成90%的

再换成95%的

那么最后

达到百分之百

达到百分之百的酒精以后

这个剩下的所有的水

水分子就被挤出去

就被脱掉

就从这个组织当中脱掉

这就是一个逐级的一个办法

大家想一想

这种办法的好处是一步一步的

那有同学说

我们能不能拿直接百分之百的酒精的就做

我们说这个不行

因为什么

百分之百的这个酒精一进来以后

会立即让组织变形

所以我们采取的是逐级脱水的办法

所以这一步非常重要

我们把这个用酒精

给它组织里面的水全部脱下来

脱下水以后

下一步的就是要进行我们叫清洗

清洗这一步

这个中文叫清洗

实际上的这一步

是我们把它叫做透明化

我们把这个脱到水的组织

放到了这个二甲苯里面去

放到二甲苯里面

二甲苯一个特性的就是让组织能够透明化

让组织

具有很好的透光效果

有利于我们的观察

所以这一步

是我们把它叫做透明化

放到二甲苯里面去

放到二甲苯那边去以后

组织透明化

下来还有一个很重要的一个步骤

就是把这个组织

一定弄的这个做成很坚固的

一个块状的东西

那么这一步

也就是说

我们要用石蜡进行包埋

也把这一块

也叫做渗透

我们把这个组织块

从这个二甲苯里面取出来

直接放到融化好的石蜡当中

大家知道石蜡一加温以后

就变成液体的

我们把这个组织块就放进去

放进去以后

然后加热到52到到六十度

这样的情况下

整个这个二甲苯融化

然后里面石蜡就侵入到整个组织里面来

把组织的整个@出来

所以我们利用石蜡

把组织给它固化起来

固化的这个组织

就比较坚硬了

当然了

这个坚硬是相对而言的

它没有像骨骼这么坚硬

但是

我们手

人手是可以随便拿动它的

另外的这种坚硬的一个好处

将来我们就是为了切片

为了切片

所以这个放了石蜡里面去

让石蜡的全部侵入到我们组织咱们当中来

大家知道这个石蜡

大家知道这是有机的对不对

所以我们这个组织

一定要把水脱干净

如果水脱不干净了

以后

石蜡就进不到组织里面去

这个组织

你这个将来石蜡在里面就不能均匀地分布

所以切出来的片子的效果就不好

所以我们一定要把这个组织当中的水

要排干净

然后让石蜡充分的侵入到组织当中去

侵入到组织当中去以后

下一步我们把它叫做硬化

也就是说

从烘箱当中

把这个石蜡跟组织取出来

放到常温下放到常温下以后

这个石蜡

这个温度就下降

温度一下降以后

这个时候呢

这个组织就全部被石蜡所包埋

就形成一个石蜡块

所以我们经常说的这个就是一个蜡块

我们在组织学上

或者将来你们到病理教研室去的时候

老师经常说拿一块蜡块

就指着这个时候

石蜡跟我们组融成的这个块

就叫做石蜡蜡块

那么这样的话

我们这个组织

就包埋好了

那么这个是我们经常讲的

最常用的包埋的一些方法

除了这些方法以外

我们说还有一些其他的包埋方法

我们这儿给大家讲

比如说用丙烯酸树脂也进行包埋

还可以用的环氧树脂进行包埋

这两种的方法也都是差不多

它这个过程差不多

但是适应于不同的染色

我们的将来在实习的时候

给大家可能会更具体的讲解

我们这个课在这里就给大家提一下就行了

那么这个

我们叫做前面讲的这个队组织的这个处理

叫做石蜡包埋

或者是后面

也叫石蜡切片

我后面切成片后也叫石蜡切片

那么下面在我们组织当中

还有一种快速的一种方法

比如说我们在这做手术

病人在病床上躺着一块肿瘤组织取下来

我们要很快的对这个组织进行判断

那么这个时候

我们就用不成这种石蜡的方法

因为它时间太长

消耗的力量太大

我们要一个快速的办法

这个时候

就要用冰冻切片

那么冰冻切片它是一个快速的一种方法

给它新鲜的组织

通过直接浸泡到液氮里面

就形成一个冻块

把这个冻块放到冷柜里面

在这个薄片上就可以切

那么这个切片的可以切到五到十个微米

那么它的这个相对来说厚一点

比刚才石蜡切片的要厚一点

石蜡切片比较薄一点

它这一个好的这个优点是快速

它很快的

我们能够这个判定一个组织的类型

同时

也有个好处

特别适合于一些酶和可溶性

自制的这个细胞定位学研究

因为我们说用石蜡这种方法

包埋的时候

这个组织

因为它要脱水

要在酒精里面浸泡

要在二甲苯里面浸泡

要在这个石蜡里面浸泡

它很多脂溶性的酶都@

然后脂溶性的东西会丢掉

所以做起来不好看

那么这个时候

我们直接用冰冻切片

也可以达到这个目的

当然问题是它的切片

是这个厚度比较厚

看起来效果不好

刚才我们讲了

这是组织块可以包埋可以冰冻

那么下面

就是把这个包埋好的组织块

或者冰冻好的组织块

要进行切片

切片我们用常用的两种切片机

一种

就是石蜡切片机

是我们这个图左边

给大家展示的手摇式的石蜡切片机

这个切片机上有一个驱动轮

上面有一个能够放石蜡的一个蜡块的架子

下面的有一个钢刀

我们摇动手动轮

然后钢刀

就在这个上面上下移动

就可以把这个蜡块切下来

切下来蜡块以后

然后放到水里面

用一个水杯接着

然后用一个玻片

把这个片子

从里面可以捞上来

这是一个技术工作

需要不断的练习才能切得很好

这个开始切的时候

可能你们掌握的不好

会切成有些会碎片

有些的切的这个会断片

有时候会把这个片子

切的均匀不一

那么这个都是可以理解的

我们下面

需要不断的练习

然后

对于这个冰冻切片

是放到一个是右边这个机器

放到这个冰冻时里面

冰冻时里面

然后有一个刀

然后搅动轮子就可以切出来的

这个

片子就切下来

而这个切下来以后

直接放了玻片上

这个片子就融化的

因为开始是冰的

它放到玻片上以后马上就融化

一融化以后

跟这个玻片就粘在一起

不需要其他的处理

就可以形成一个很好的切片

这个是通常的常用的两种切片的方法

当然我们组织学的研究的组织很多

我们还有其他的一些制作玻片的一些方法

那么这

我给大家也列了三种方法

那么第一个就叫涂片

比如说我们经常的在体检的时候

需要检查你的这个血液

在你的小拇指上扎一针

挤的血放到一个载玻片上

那么放的这个载玻片上以后

用另一个这个载玻片的一刮

就把这个片子

涂到这个玻璃片上

那么这个方法就涂片

涂片很简单也很方便

这是一个涂片的办法

那么还有一种办法叫做铺片

那么有一些组织

比如说我们的肠系膜啊

它很薄

把它拉下来

直接往片上一铺

就可以铺成一个很好的一个片子

那么我们这儿给大家展示的这张片子

左下面这张图

就是肠系膜的铺片的结果

所以它这个比较薄

就不需要切了

不需要什么样的办法

就直接铺上了就可以了

那么还有一些组织非常坚固

非常难难制成这个好的切片

对这样的一些组织

就要进行一些特殊的加工

我们就是用的叫做磨片

叫Ground section磨片

这主要是指的是骨组织

那么右边这张图右下角这张图

给大家展示的就是骨的一个磨片

大家看这是通过这个磨

打磨这样形成的这么一个切片

所以这三个的是一些特殊组织

所用的切片的方法

那么对于大多数组织来说

我们现在

还是用的是石蜡切片

和冰冻切片

这两种方法