分光光度计的操作要点资料文件与下载

我们在前面的课程中已经学过了分光光度计的基本原理和使用流程，在实际使用过程中，还有几个环节需要提醒各位同学。

首先，分光光度计在使用之前要预热20-30min，预热时间不足会导致仪器读数显示不稳定，但是光源灯都有一定的寿命，所以应计算好测定时间再开机预热，期间如果需要关闭光源，则需要等待光源彻底冷却后再次开灯；第二，放置分光光度计的台面上不得有震动、气流、磁场和强光照射，否则都会导致仪器读数显示不稳定；

实际使用中，同学们容易在以下几个环节出错，应给予特别注意：
第一，忘记调节波长。波长错误会导致所有测定数据无法使用，所以请特别记住，所有测定第一步要确认波长。

第二，手持比色杯时，接触光面。这会导致比色杯光面沾染手指上的蛋白、油脂等污渍，影响测定准确性。

第三，样品液倒入比色杯后，没有检查杯壁。有的同学在把比色杯放入样品池测定后，发现读数一直改变，有时就是因为杯壁沾有液滴，液滴的流动带来液层厚度的微小变化，从而导致读数变化。实际操作中，应在倒入样品液后，手持比色杯毛玻璃面，迎着光观察，如果光面出现污渍或液滴，需要用滤纸吸去液体，并用擦镜纸认真擦拭干净后再测定。

第四，测定时遇到某数值突然增大，这很可能是误将比色杯毛玻璃面置于光路上，导致吸光度大幅度增加。实际操作时，一定要先阅读说明书或观察清楚光路方向，确保光线通过的是比色杯光面。

第五，标准曲线斜率线性差，或几个平行样之间极差偏大。这种情况的原因往往是因为学生实验中，每台仪器一般配备3-4个比色杯，需要在测定过程中循环使用。如果润洗操作不到位，残留的待测物会影响后续样品的测定。因此在比色杯润洗过程中，务必注意每次倒掉液体后都要在吸水纸上把杯口的多余液体吸净，但是千万不能将纸深入比色杯内部擦拭，避免留下纸屑影响测定。然后再用待测液润洗四面杯壁，润洗2-3次再加入待测液。

润洗的过程还要注意待测液的总液体量，对于学生实验常用的分光光度计来说，一般使用1cm直径的比色杯，而分光光度计的光路一般在比色杯高度一半的位置，因此每只比色杯中至少要装3-4ml以上的液体才不会影响测定，具体体积还因仪器光路高度而稍有差异，一般来说，液体高度在比色杯2/3到3/4比较合适，所以润洗时要特别注意用量，以免最后剩余液体不够测定。

测定过程中，每次打开样品池盖更换样品都可能导致仪器读数有所偏移，因此需要将空白管留在仪器内，每一次测定样品前均需确认空白管透光率T=100%，再测定其他样品的吸光度值。

分光光度计在生物化学实验中一般用于标准曲线法测定待测物浓度，而为了尽量降低待测物测定误差，一般会对待测物设置平行样，也就是同一个待测物按相同的操作步骤做多个样品，然后在完全相同的条件下进行同步分析。为了尽量减少样品间的误差，尽量将平行样在同一批次进行测定。

总结一下，在分光光度计使用过程中，应该注意以下细节：

（1）     不要忘记调节波长；

（2）     手持比色杯磨砂面；

（3）     检查杯壁洁净再放入分光光度计；

（4）     注意光路方向，让比色杯光面置于光路；

（5）     注意润洗的操作，尽量去除残余液体的影响；

（6）     注意润洗液体用量，以免剩余液体不够测定；

（7）     每一轮测定都要用空白管调透光率；

（8）     平行样尽量在同一批次测定。

实际实验操作过程中，请同学们注意将操作细节与我们讲过的原理相互印证，深刻理解其中的道理和操作的必要性，将操作细节逐渐变成自己的操作习惯，才能确保所有测定的准确性。