当前课程知识点:基础生物化学实验 >  第三章 物质的定量测定 >  第一节 蛋白质的定量测定 >  紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

返回《基础生物化学实验》慕课在线视频课程列表

紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算在线视频

下一节:紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

返回《基础生物化学实验》慕课在线视频列表

紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算课程教案、知识点、字幕

在学过了紫外法测定

蛋白质浓度的实验原理和操作以后

我们一起来试试如何计算

待测液中的蛋白质浓度

我们首先来学习

最常使用的标准曲线法

计算待测液蛋白质浓度

这个表格是一位同学做出的实验数据

他设计制作的标准曲线

并且测定了一份纯蛋白样品的吸光度A值

这就是他获得的全部实验数据

我们可以用三种方法来制作标准曲线

第1种是坐标纸描图法

具体的操作是取一张坐标纸

在下面画上一条横线

这是横坐标

左侧画一条竖线

这是纵坐标

根据所设计标准

蛋白质的浓度分布在横坐标的轴上

标记出各浓度点

并注明蛋白质浓度和浓度的单位

紫外法的浓度单位是毫克每毫升

然后再纵坐标轴

根据数据所测定的吸光度范围

标记出个吸光度的点

并注明A280

在图上注明紫外法测定蛋白质

浓度标准曲线图的名称

这样标记后整个标准曲线图

就变得一目了然

方便自己和其他人查看

根据标准曲线各浓度和

吸光度的对应关系

在坐标纸上标记出每一个标准曲线点

然后用一条经过原点的直线

将所有的点连接在一起

注意因为操作误差有的点

可能不完全符合线性

画线的时候

应该让各点在线上线下均匀分布

这条就是本次紫外法测定

蛋白质浓度的标准曲线

计算三个平行样品吸光度的平均值

结果是0.359

在纵轴找到这个点

此点开始画一条横线

与标准曲线交叉处再画一条竖线

竖线与横轴的交叉点读数

即为待测样品的浓度

本次测定的结果约为0.5

第2种方法是利用Excel

等软件绘制散点图

图上同样要注明横坐标蛋白质浓度

和单位以及纵坐标A280

还有图的名称 紫外法

测定蛋白质浓度标准曲线图

便于自己和其他人查看

然后通过添加趋势线的操作

将这些点连接

并显示公式和R方

这样我们就获得了一个方程式

同样取待测样吸光度的

平均值0.359

代入方程计算出浓度

X=0.359-0.008

除以0.6999就等于0.502

所以待测样品的浓度计算结果

就是0.502毫克每毫升

R方可以告诉我们标准曲线的线性程度

R方越接近1

说明标准曲线的线性就越强

如果R方降低需要检查实验设计

的浓度范围是否在线性范围内

以及你的实验操作是否正确

除了用坐标纸描点和软件绘图以外

还可以直接用计算器或者软件

对标准曲线的数据进行计算

得到拟合方程和R方

然后将待测样的平均值

代入方程直接计算出浓度

可是我们的计算还没有结束

同学们还记得我们在配制

待测样的时候加样体积吗

我们是用一毫升原始的待测

液加三毫升的水配制成的

所以相当于对原始待测液稀释

4倍之后再进行的测定

因此我们之前计算出的

待测液浓度还要乘以4

这样最后计算出待测蛋白质

溶液的浓度就是

2.008

我们在测定时将样品稀释

是为了使其吸光度值落在

标准曲线的中段

减少相对误差

计算的时候一定要记得乘以稀释倍数

得出原始溶液的浓度

基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质的盐析提纯

--蛋白质的盐析提纯

--盐析操作注意事项

--盐析操作注意事项

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

--离子交换层析

--亲和层析

--亲和层析

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

--核酸的制备原理及基本步骤

--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算笔记与讨论

也许你还感兴趣的课程:

© 柠檬大学-慕课导航 课程版权归原始院校所有,
本网站仅通过互联网进行慕课课程索引,不提供在线课程学习和视频,请同学们点击报名到课程提供网站进行学习。