3.15.快繁试验方案的设计与实施在线视频

大家好

任何一项能带来经济和生态效益的植物组培技术

都是通过反复的组培试验来开发完成的

组培方案是确保组培试验成功的前提

在离体培养时

来源于不同植物种类

同一种植物不同部位的外植体

对营养物质和培养条件的要求均不相同

因此在对某种植物进行离体培养前

首先必须制定出一个科学合理的试验方案

然后按照试验方案进行试验

筛选适合其生长发育和增殖要求的各项指标

指导组培规模化生产

指导组培规模化生产

第一个环节.相关文献资料的分析

文献资料的分析首先要确定目标植物

目标植物的确定是由组培试验的目的来决定的

也往往由企业生产决定的

然后是文献收集与分析

参考文献获得的途径一是植物组织培养技术方面的专著

教材专业期刊等

二是专业网站如中国组培网中国知网等

当培养对象缺乏文献可查阅时

可参阅同属或同种不同品种的组培研究文献

分析研读组培文献时

首先要注意收集以下几方面的信息

一是被选择的植物基因型外植体来源部位

生理状态

发育年龄

取材季节

处理方法等内容

二是离体培养各阶段所选用培养基的基本类型

配方改良及筛选方式方法

尤其是培养基中添加植物生长调节剂的种类和剂量

三是外植体培养条件的选择与调控情况

四是试管苗驯化条件及移栽基质的配制方法

其次对收集到的各种技术信息进行深入分析整理

归纳总结出影响目标植物离体培养的主要因素

第二个环节

组织培养试验方法的选取

植物组织培养中常用的试验方法主要有三种

第一种方法是做预备性试验

在确定离体培养某一植物后

阅读相关文献资料就可以参考文献上的数据

简单拟定一个方

或直接按照文献上的数据进行预备性试验

然后便可循着试验的结果设计较为完整的试验方案

第二种方法是做单因素试验

单因素试验中各项条件和因素都维持在一般水平上

只变动一个因素

以找出这一因素对试验的影响和影响的程度

例如培养基中其它成分和用量都不变

只变动NAA的用量在每升 0 0.1 0.5 1.0mg 之间

以找出NAA用量对培养物生根的影响

单因素试验除了要研究的那一个变量以外

其余各方面都应尽量相同或尽可能相接近

实验应安排得很简单

在各组处理项目上必须有一定数量重复

随试验规模和要求不同

大多每项要有4～10瓶每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗

这些材料接入的数量和质量都应细心地尽可能保持一致

设置的重复数量越大

试验进行得越仔细所取得的结果也就越可靠

第三种方法是做多因素试验

多因素试验是指同时研究两个或两个以上因素的试验

多因素试验不仅可以研究各个因素单方面的效应

而且还能研究因素间的相互作用

所以多因素试验说明的问题比较全面比较切合实际

多因素试验实施主要有完全实施和不完全实施两种方法

完全实施方案指每个因素的不用水平都与另外因素的所有水平相互配合

构成的试验处理

例如利用 NAA四个水平（0、0.1、0.5、1.0mg/l）

与 6-BA四个水平（0、0.5、1.0、2.0）

共得到16个处理

如果因素过多或试验水平过多

采用全面实施方案试验规模很大往往难以全面实施

不完全实施方案

指由全面实施方案的一部分处理构成试验方案

不完全实施方案多采用正交设计正交设计是多因素分析的有力工具

它可以方便地从众多因素中选出主要影响因素及最佳水平

可以方便地从较少的试验次数中得到较好的试验结果

例如对于3因素3水平试验

若用完全组合试验处理数为三的三次方二十七个

若采用正交设计不考虑交互作用

可用正交表L9安排试验方案仅做9种不同搭配的试验

就能反映试验方案包含27种组合的全面信息

第三个环节是主要培养条件及影响因素的选取

一般组织培养的培养条件选取包括基本培养基植物激素的配比

糖浓度pH等4个方面的选取

1.基本培养基的选择

在己成功试管繁殖的植物种类中

以采用MS为基本培养基的为最多

因此在一般的培养中可先试用MS培养基

如发现有不利的影响或不够理想

要想对基本培养基加以改进的话首先降低MS培养基的浓度

其次可以选择在基本成分上与MS培养基有显著不同的其它培养基

以试用对比如B5 White Nitsch 培养基等

2.植物激素配比的选择

要使植物组织分化出苗并使苗能快速增殖

选择植物激素的种类和调节细胞分裂素与生长素的用量是一个非常重要的环节

在选定或暂时认定某一基本培养基后

通常首先要考虑的都是植物激素的配比

例如采用MS为基本培养基

细胞分裂素用6-BA生长素用NAA

选取不同激素用量也可以用两组单因素试验来进行

第一组找出适宜的6-BA用量

第二组找出适宜的NAA用量

在第一组试验中NAA的用量不变

注意观察BA对培养物的影响

在第二组试验中6-BA的用量不变

注意观察NAA的影响

从试验结果中可以选出较优的一两种处理

或可预示在这两组试验中未曾出现的组合需要调整后再继续试验

对于许多植物来说这样的试验已足够了

特殊情况下，如解决不了问题，就可进一步选择

KT ZT 2-iP 等其它细胞分裂素

以及IAA IBA 2 4-D 等其它生长素

并试用正交试验法优选法等安排多因素的或单因素的试验

3是糖浓度的选取

采用单因素试验或结合植物激素的选取

采用正交试验来确定最佳糖浓度

通常选择的幅度很小对大多数植物而言

适宜的糖浓度为20g或30g

个别情况用到每升40g

4是pH的选取

般植物对pH值的要求不很严格

采用pH5.6或5.8即可

有些喜酸性的植物如山茶 杜鹃和叶子花等

可以适当降低pH到5.4或5.0

试用于新培养的种类时可参考过去已发表的类似植物

也可采用只变动pH值的单因素试验

可以迅速了解到适宜的pH值

在培养过程中

培养基的pH值会随养分消耗而变动

只要培养物的生长增殖能满足快速繁殖的要求

就不必过于精细

最后需要对综合因素的做最终确定

在各个单项因素的最佳条件找到以后

将这些最佳条件综合到一起进行全面的试验

并根据实验结果再做适当调整试验工作也就可结束

下一步将研究成果扩大

应用到大规模的种苗快速繁殖中去