当前课程知识点：植物组织培养技术 > 3. 植物组织培养快繁技术 > 3.11. 污染 > 3.11.污染
大家好
污染是组织培养最常见和首要解决的问题
这里所说的污染是指在培养过程中
由于细菌真菌等微生物的侵染在培养基的表面
滋生大量菌斑造成培养材料不能生长的现象
首先我们看一下污染发生类型和症状有哪些
引起污染的微生物主要有芽孢杆菌大肠杆菌等细菌
和毛霉 根霉 青霉等真菌
与此相对应的污染类型就分为
细菌性污染和真菌性污染
细菌性污染的症状是菌落呈黏液状颜色多为白色
与培养基表面界限清楚
一般接种后1～2天就能发现
而真菌性污染的症状
是菌落多为黑色 绿色 白色的绒毛状
棉絮状与培养基和培养物的界限不清
一般接种后3～10天后才能发现
实际生产中要明确辨认出是何种污染
以便有针对性地采取防治措施
那么哪些因素会造成污染
一是培养基及各种使用器具器械消毒不彻底
再是外植体灭菌时不彻底有杂菌残存在外植体表面
还有就是操作时人为因素带入环境不清洁
超净工作区域污染等都会引起污染
对于污染得控制,我们可以从下面五个方面来采取措施
第一点严格进行培养基及器械灭菌
在生产中无菌操作首先面临的是培养基的灭菌
它需要在121℃灭菌20～30min
灭菌效果取决于灭菌温度及其持续时间 压力
非常重要的一点是在压力上升前将冷空气排出
使用的所有接种器械均需进行高温灭菌后才能使用
而且在接种的过程中每使用1次
还需要蘸工业酒精在酒精灯火焰处灼烧灭菌
或插入电热灭菌器中灭菌
在不慎接触到污染物时必须进行彻底的灼烧灭菌
否则极易引起器械污染进而引起交叉污染
第二点 注意外植体的选择与灭菌
一是做好接种材料的室外采集工作
最好春秋季节采取外植体
晴天下午采取外植体阴雨天不要采取
优先选择地上部分作为外植体
外植体采集前喷杀虫剂杀菌剂或进行套袋等
二是接种前在室内或无菌条件下
对材料进行预培养以新抽生的枝条作为外植体
三是在大规模组培生产前一定要进行灭菌效果的试验
摸索出最佳的灭菌方法
再进行成批量的材料灭菌处理
四是及时从培养间取出污染的材料
防止在培养室内交叉污染
五是严格规范地进行无菌接种工作
在接种时由于人为的因素很容易将各种微生物带入
引起比较严重的污染要求接种人员注意个人卫生
洗手后进入接种室接种时经常用75%酒精棉球擦拭双手
在酒精灯火焰的有效控制区域内进行操作
在操作规范的前提下尽量提高接种速度
接种时接种员双手不能离开工作台
如果需要离开工作台必须用酒精棉球擦手后再接种
接种时开瓶和封口动作都要轻
接种后旋转灼烧培养瓶口
避免任何部位如手 衣袖等在接种用具
培养皿和揭开的培养瓶口上方移动各种器具
容器用具等在放入超净工作台前要用酒精棉球擦拭
包括未接种的培养基瓶待转接的材料瓶
操作区内不要放入过多物体避免气流被扰乱
第三点.保持环境条件洁净
在大规模的组培生产中
大环境的污染也会使各个环节的污染明显增加
严重时会使生产无法进行
接种室和培养室要进行定期的熏蒸消
一般使用高锰酸钾和福尔马林
这种方法效果好但对人体有一定的危害
平时还需用紫外灯进行照射消毒
也可用臭氧灭菌机灭菌
这种方法对大环境消毒效果较好，而且使用灵活方便
对人体的危害也相对较小
第四点.规范使用超净工作台
为了使超净工作台有效工作防止操作区域本身带菌
要定期对初过滤器进行清洗或更换
对于内部的超净过滤器每隔一定时间要进行
操作区的带菌试验如果发现失效则要整块更换
此外还需要测定操作区的风速使其达到每分钟20～30米
另外在每次使用时应提前15～20分钟打开机器预处理
并对操作台面用75%的酒精进行喷雾消毒
最后我们给大家讲一下组培苗污染后的处理
真菌污染后即使仅形成菌丝菌丝能够达到材料内部
因此真菌污染是灭绝性的污染的组培材料
必须经高压灭菌后再进行清洗
但若细菌污染由于细菌繁殖是靠芽孢
细菌不会弥散整个空间因此只要发现的及时
将材料上部未感菌的部分剪下转接至新的培养基上
材料有可能还能继续使用
用抗生素等杀菌药剂的处理虽有不少报道
但至今还未发现那种抗生素能够对各种菌都有效
并且抗生素常常也会影响植物材料的正常生长与分化
另外一些药剂虽有的杀菌效果好但往往容易引起盐害
也无法利用
对一些特别珍贵的材料
可以取出再次进行更为严格的灭菌
然后接入新鲜的培养基中重新培养
但灭菌时间不好控制易造成药剂伤害致死
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础--作业
-1.2. 植物组织培养的类型
-1.2. 植物组织培养的类型--作业
-1.3.植物组织培养的发展简史
-1.3.植物组织培养的发展简史--作业
-1.4. 植物组织培养的应用
-1.4. 植物组织培养的应用--作业
-2.1. 植物组织培养实验室布局
-2.1. 植物组织培养实验室布局--作业
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备--作业
-2.3. 植物组织培养常用仪器
-2.3. 植物组织培养常用仪器--作业
-2.4. 植物组织培养常用器皿
-2.4. 植物组织培养常用器皿--作业
-2.5. 培养基的基本成分及其作用
-2.5. 培养基的基本成分及其作用--作业
-2.6. 培养基的种类
-2.6. 培养基的种类--作业
-2.7. 培养基母液的配制与保存
-2.7. 培养基母液的配制与保存--作业
-2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
--培养基母液的配制
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
-2.9. 培养基的配制与灭菌
-2.9. 培养基的配制与灭菌--作业
-2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.11. 无菌操作
-2.11. 无菌操作--作业
-3.1. 外植体的选择
-3.1. 外植体的选择--作业
-3.2. 初代培养
--3.2.初代培养
-3.2. 初代培养--作业
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养--作业
-3.4. 继代培养
-3.4. 继代培养--作业
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作--作业
-3.6. 试管苗生根
-3.6. 试管苗生根--作业
-3.7. 试管苗驯化与移栽
-3.7. 试管苗驯化与移栽--作业
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽--作业
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径--作业
-3.10. 影响快繁因素的调控
-3.10. 影响快繁因素的调控--作业
-3.11. 污染
--3.11.污染
-3.11. 污染--作业
-3.12. 褐变
--3.12.褐变
-3.12. 褐变--作业
-3.13. 玻璃化
--3.13.玻璃化
-3.13. 玻璃化--作业
-3.14. 体细胞无性系变异
-3.14. 体细胞无性系变异--作业
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施
--3.15.植物组织培养快繁试验方案的设计与实施 .pdf
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施--作业
-4.1. 脱毒苗培育的意义
-4.1. 脱毒苗培育的意义--作业
-4.2. 脱毒的主要方法
-4.2. 脱毒的主要方法--作业
-4.3. 脱毒的其他方法
-4.3. 脱毒的其他方法--作业
-4.4. 脱毒苗的鉴定
-4.4. 脱毒苗的鉴定--作业
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖--作业
-4.6. 甘薯脱毒步骤
-4.6. 甘薯脱毒步骤--作业
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系--作业
-5.1.人工种子
--5.1.人工种子
--人工种子.pdf
-5.1.人工种子--作业
-5.2.试管微茎
--5.2.试管微茎
--试管微茎.pdf
-5.2.试管微茎--作业
-5.3.无糖培养技术
-5.3.无糖培养技术--作业
-考试题1
-参考文献
