4.7 细胞实验相关安全操作在线视频

下面的我来给大家介绍一下

细胞房相关的安全操作

我们每次做细胞

都是为了

比如说生物活性评价

以及我们相关病理生理机制的研究

所以医学相关的实验还有研究生

都会用到我们所说的细胞房

我们现在看见的就是细胞房

你要在进入细胞房之前

要做一些预实验的准备

比如说下面这个实验

它应该怎么做

流程是什么

你都应该在你的实验记录本上

做好流程的规划

那么在实验之前

你还要准备好去检查我们所用的细胞

有没有或是相关的这些牛血清

以及我们所用的培养基

都是不是准备好了

那么你所做的这些工具药

或者你自己要筛选的药

是不是也都准备好了

那么准备好这些之后呢

我们还要把细胞房

提前做一些灭菌准备

首先呢

我们看见的就是紫外灯的开关

这个紫外灯的开关

大家看它是一个定时开关

这里面有从开一直到六十分钟

一般呢

我们可以定时

比如说定时到三十分钟

那么在操作之前

我们先把里面生物安全柜的紫外灯打开

然后把实验的相应的东西准备好之后

比如说水浴锅打开

然后呢

再把实验通风橱里面的一些

所以必须的东西准备好最后呢

你出来之后要把整个细胞房进行灭菌

那么你就要进行这个操作

把这个开关拧到三十分钟

然后它会定时用紫外线杀菌三十分钟

三十分钟之后

你再来进来去进行操作

那么操作的时候

这个紫外灯虽然已经关掉了

灭菌效果挺好的

那么它里面其实还有一部分

我们所说的臭氧

所以我们要把生物安全柜通风

要打开生物安全柜

里面有一个非常级别很高的内循环

它却可以保证不用酒精灯状况下

就可以在灭菌的情况下

去进行细胞相关的操作

下面呢

我就要进入细胞房

进行细胞相关的安全操作

下面呢

我们就先进入细胞房

首先第一步

就是我们所说的要进行换鞋套

换完鞋套之后

大家看换完鞋套之后

我们下面就要进行穿隔离服

戴手套

然后戴帽子

最后再戴口罩

然后进行到我们所说的生物安全柜

那个位置

关紫外并把我们所有的实验用具

转移进去

这样一个操作过程

那么首先得是要带手套

换上我们的隔离服

然后要把帽子戴好

带完帽子之后

我们要戴口罩

就把鼻子位置捏一下

然后呢

要把上下密封好

跟鼻梁骨贴合好之后

进入到我们细胞真正操作的空间

我们把隔离服都穿戴好之后

下面呢

就是要把已经灭好菌的生物安全柜

紫外灯关掉

就是这个钮

就是这个钮

然后呢

我们把灯到时候要点亮

大家注意这个生物安全柜

它上面是有一个生物安全的标志的

也就是说

对于我们整个的操作

其实它这里边是无菌的

下面我们专门请一位同学

来进行无菌操作

下面的我们可以看见

在做细胞操作的过程中

你要把之前准备好的牛血清细胞

还有我们所要灭菌的一些

培养瓶离心管

而我们所用到的移液枪都准备好

我都放在我们现在看见的工作区

在右手边的还有一个放废液

以及放废物的专门的

我们叫废物的区域

下面的我们要进行的操作

就是把细胞转移出来

然后呢

要往里面加胰酶

放到孵箱里面孵育

一分钟到几分钟不等

我们要在显微镜下去观察

胰酶是不是把细胞都已经

消解成单个的细胞了

这个操作呢

是为了后面我们要把细胞收集出来

种到96孔板里

我们可以看见操作的生物安全柜里面

它们是不具

我们没有用的酒精灯去进行操作

因为这个生物安全柜等级比较高

所以它整个里边都是无菌的状态

因此

我们在操作过程中

只要注意自己手上

按照标准操作规程去操作

就不会出现污染情况

所以第一点

我们可以不用酒精灯去操作

第二个呢

我们在操作的时候

整个的牛血清也好还有胰酶也好

都要提前用37度的水浴进行孵育

在细胞房操作的过程中出现了问题

第一个就是我们所说的水浴锅

水浴锅你应该每一次用37度的水浴

提前进行孵育我们的牛血清

这个过程中呢

往往会出现问题

因为上一个同学没有观察它的水位

当下一个同学在进行操作的过程中

水位不够

或者水已经烧干了

他并没有注意到里面的情况

就会导致水浴锅

发生我们所说的温度过高会产生

着火现象

所以第一条大家在做细胞实验时候

一定要检查水浴锅

水位够不够

它的温度设定是多少

一定在37度才能把

你要孵育的样本放进去

第二个呢

就是我们在做生物操作的过程中

所要用到的移液枪操作

因为在讲

生物安全这一部分的过程里面

我们知道在实验室里面

微生物污染它是

比平时普通人的生物污染

几率要高很多倍

原因在于什么

原因在于我们的进行操作的过程

特别是在生物安全柜

里边操作过程中

它会产生一些气溶胶

因为吸入比如从我们呼吸道进入体内

造成实验人员的感染

所以呢

我们在刚才进行移液枪操作的过程中

我们的动作要缓慢

不能够特别急速地

推动我们的液体或细胞转移

这个速度过快

会产生很多我们所说的泡沫

就会生成我们所说的气溶胶

里面就会包括细菌细胞

会危害我们所说的实验人员

因此呢

在这个操作过程也要缓慢

不是说要使劲把它打松散了就行

我们其实

大家看到的移液器的移液枪的枪头

它的尖端是非常细的

液体流过它的速度其实是很快的

因此我们只要缓慢的吹打细胞

就可以达到我们的目的

当一胰酶细胞消解消解之后呢

我们要加培养基进行综合

然后呢

要用

移液枪把我们里面的细胞

吹散成单细胞的状态

再转移到离心管里面

离心去除含有胰酶培养基

再重新加新的

培养基进行再一次地吹散

让它形成均匀的一个细胞混悬液

再把细胞混悬液

种到我们所说的培养板里面去

在这个操作里面

有一个地方要格外的注意

就是我们在离心过程

以及在转移把废液

转移到我们看到废液的

一个小皿里面的过程里面

也会形成气溶胶

所以整个的操作过程

我们不能图快

要缓慢的把废液移除到

我们的废液皿里面

这点很关键

大家一定要注意离心机的操作

当离心一千转三分钟之后

细胞就存在离心管底部了

下面要做的操作呢

就是把细胞

上面的这个培养基

混合胰酶的培养基倒出来

它作为医疗废物

要处理掉

然后加入新鲜的

培养基

制成单细胞悬液之后

我们就要往96孔板里种新的细胞

打开一个新的无菌的细胞板

然后就要用

排枪

往每一孔里面转移五千个细胞

五千个细胞溶在一百微升的培养基里

把刻度调到一百微升

你要检查一下每一个

枪头黄色的枪头是不是都

比较密闭的结合

在排枪上

排枪的操作跟

单支的移液枪是一样的

大家不要来回的吸打

这种我们所说的细胞悬液

每一次吸上来之后就速度要均一

才能不会产生空气柱不会产生气泡

做好标记

当我们把细胞操作

特别是96孔板放到孵育箱之后

剩下的工作的实际上就是

清理整个台面

以及如何处理我们的生物垃圾

生物垃圾

大家可以看见它

包括我们用过的一些

培养的离心管培养瓶

还有我们的玻璃容器

我们要分类进行处理

这个玻璃的吸管

我们要再次清洗过之后呢

到高压灭菌锅去再次灭菌可以重复

其他的一次性的离心管

我们要重新的进行灭菌

另外液体呢

我们还要重新加入84

把它彻底的灭菌之后

才能扔到黄色的塑料袋里面

进行垃圾的回收

这一点是非常重要的

当我们把这些垃圾处理完之后

它主要涉及到一个就是生物安全

它里面危险性的这些

无论是液体还是用过的离心管

都要用84

或者是高压灭菌锅灭完菌之后

才能交给生物垃圾的黄色塑料袋

进行回收

这点大家一定要记住

最后一条呢

就是把整个的垃圾处理完

我们还要把台面进行清理

有可能有的液滴溅出来

那么

为了避免它再次生成更多的气溶胶

我们要拿乙醇

要进行把台面再一次的擦干净

最后再用紫外线去进行消毒

这就是整个的一个细胞实验