细胞培养的基本方法在线视频

大家好 这堂课我们学习细胞培养

及干细胞治疗

接下来我们介绍细胞培养的基本方法

细胞的生长方式

包括贴壁生长和悬浮生长

贴壁生长是指细胞必须依附于这个底物

才能够生长

从形态上大体可以分为上皮细胞型

以及成纤维细胞型

另外还有一些不能确定其稳定形态的细胞

比如游走细胞型 多型细胞型

而悬浮细胞是不需要贴附于底物

呈悬浮状态就可以生长的细胞

贴壁细胞里面的上皮样细胞

是来源于外胚层或者是内胚层的细胞

比如皮肤及其衍生物

消化道 乳腺 肺泡 上皮型肿瘤等等

它的形态是类似于体内的上皮细胞

呈扁平状或者是不规则多角形

中间有圆形的核

上皮样细胞

它的生长特点是比较容易连成片生长

细胞与细胞之间是紧密相连的

类似于铺石状

细胞生长的时候

是成膜状的移动

很少有这个脱离细胞群

而单个活动的细胞

贴壁细胞里面的成纤维样细胞

它的来源是中胚层间充质组织起源的细胞

比如成纤维细胞 心肌细胞 平滑肌细胞

内皮细胞 成骨细胞等等

它的形态是类似于体内的成纤维细胞

它的胞体是呈梭形的或者是不规则三角形

胞质向外伸出2到3个长短不等的一个突起

中间有卵圆形的核

成纤维样细胞的生长特点是可以成放射状

或者是旋涡状

但是并不紧密连成片

细胞和细胞之间它的接触也容易断裂

而形成单个的细胞行动

那么游离的成纤维细胞

它常常有几个伸长的细胞突起

这是成纤维样细胞的生长特点

贴壁细胞它的生长过程主要包括游离期

它是指细胞还是呈悬浮状态

胞质是回缩的

细胞是成为一个圆球形

吸附期是指细胞开始接种以后

到贴壁这段时期

它一般是在24小时之内可以完全贴附

潜伏期是指细胞有生长活动

但是没有增值

对数生长期是指细胞

随着时间变化而成倍的增长

这个时期的细胞的活力是最佳的

所以我们选择实验研究的时候

通常是选这个时期来进行

停止期我们又称为平台期

它是指细胞长满瓶壁以后

细胞具有活力但是不再分裂

它的机制主要是接触抑制

或者是密度依赖性

悬浮生长型细胞

它主要来源于血 脾或者是骨髓

比如淋巴细胞

它的特点是悬浮生长良好的一个细胞

它的形态是圆形的

悬浮细胞的优点是因为它的生存空间大

可以提供比较大量的细胞

另外传代和收获都比较容易

只需要通过离心收集就可以了

但是也有一定的缺点

比如观察不方便

细胞容易游走不固定

而且大多数细胞它是不能够悬浮生长的

悬浮细胞我们可以举个例子

比如KU812

它是人嗜碱细胞性白血病细胞

它的培养基是1640再加10%的血清

细胞是成一个圆形的

是悬浮生长的

这是KU812的一个培养的一个图片

悬浮生长的细胞和贴壁生长的细胞

它的传代方式是不同的

悬浮生长的细胞主要是采用离心法传代

它通过收集细胞离心以后去上清

沉淀物加新鲜的培养基混匀以后再进行传代

而贴壁生长的细胞

它主要是采用酶消化法传代

最常采用的是0.25%的胰蛋白酶液

来消化传代

下面我们强调首次传代需要注意的几个事项

首先要注意细胞的生长密度不高的时候

不能急于传代

如果这个时候传代的话

反而影响细胞的生长

另外原代培养的贴壁细胞

消化时间一定要严格控制

如果消化时间过长

会对细胞造成比较大的损伤

对于贴壁细胞已经消化下来以后

我们要将沉淀的细胞吹散成单个细胞

这个时候一定要轻柔

要减少对细胞的机械性损伤

而且原代培养首次传代

我们还要注意传代的细胞接种数量

要比一般的传代要适当的多一点

传代的培养基的PH值也适当的偏低一些

培养液里面的血清的浓度

我们可以适当的加大

通常到15%到20%

这个知识点我们就介绍到这里