细胞培养的基本条件在线视频

大家好

这堂课我们学习细胞培养及干细胞治疗

接下来我们介绍细胞培养的基本条件

关于细胞培养的基本条件

我们重点介绍

细胞培养的无菌条件和细胞的生长条件

细胞无菌的条件

主要是包括细胞培养的操作的无菌环境

通常我们做的细胞培养

是在无菌室里面进行的

它的构成一般是由更衣间

缓冲间和操作间三个部分组成

我们在使用无菌室之前

是需要紫外照射15到30分钟

然后进行操作

而且无菌室要求每周

用甲醛熏蒸两个小时以上

以及每个月要用新洁尔灭擦拭地面一次

来保持无菌室的一个无菌环境

我们细胞培养通常是在无菌室里面的

超净工作台进行的

超净工作台在使用之前

也需要开启柜内的紫外灯照射

10到30分钟

然后预工作10到15分钟

它的目的是去除臭氧

使这个工作台面和空间成一个洁净的状态

而且我们也强调在使用超净工作台完成以后

一定要用70%的酒精

将台面和台内的四周要擦拭干净

细胞培养除了细胞操作的无菌环境以外

与细胞接触的一切物品都要经过消毒处理

我们通常是采用湿热消毒和干热消毒

湿热消毒是采用压力蒸汽消毒器

它的压力需要达到15磅

温度是121度

而且要维持20到30分钟以上

才能达到这个消毒的效果

湿热消毒主要是应用于培养基 平衡盐

还有一些手术器械等

干热消毒的温度是在160到180度

而且要维持在两个小时以上

才能达到消毒的效果

它主要是应用于一些玻璃器皿的消毒

细胞生长的条件

是需要营养条件和生存环境

营养条件包括碳水化合物

氨基酸和脂类

同时还需要一定量的无机盐

维生素或者是微量元素

它的生存环境是包括温度

气体环境和PH值

通常细胞培养是在37度左右

它的气体需要是氧气和二氧化碳

细胞培养的培养基

它的PH是7.2到7.4之间

二氧化碳在这里起的作用就是

维持这个培养基的PH值在7.2到7.4之间

细胞培养的水的要求是纯净的

不含有离子和其他杂质的

通常我们做细胞培养

用的水是三蒸水或者是二蒸水去离子

平衡盐溶液包括生理盐水 PBS

D-Hank's等等

它的作用主要是维持细胞的一个渗透压

PH调节液包括碳酸氢钠液

还有HEPES缓冲液

消化液有胰蛋白酶溶液

EDTA溶液 胶原酶溶液

我们做贴壁细胞的消化的时候

主要是用于胰蛋白酶消化液来消化

或者是EDTA溶液

如果是组织分离单个细胞的话

我们比较常用的是胶原酶溶液

抗生素溶液是指青霉素和链霉素的联合使用

也就是我们俗称的双抗溶液

培养基包括天然的培养基以及合成的培养基

天然培养基主要是血清和组织提取液

血清我们通常是采用的胎牛血清

它的使用浓度一般是在5%到20%

我们最常是采用的是10%

这里要强调一下

血清的解冻是不能从-20度直接拿到室温

直接解冻

是需要从-20度到4度

溶解一天

然后在室温下全溶

再进行分装或者使用

如果是直接解冻的话

会导致血清里面的蛋白质发生沉淀

而影响血清的质量

组织提取液

比如鸡胚和牛胚浸液

这个是早期用于动物细胞的培养

现在已经很少用了

合成培养基

是指根据细胞生存所需要的物质

的种类和数量

用人工的方法模拟合成的

包括四大类物质

无机盐 氨基酸 维生素和碳水化合物

培养基种类有很多

我们比较常用的有1640

DMEM M199或者是MEM

人工合成的培养基

只能够维持细胞的生存

如果是要细胞生长和繁殖的话

还需要补充一定量的天然的培养基

比如血清

细胞培养还需要无机盐

包括氯化钙 氯化钾 硫酸镁

氯化钠 碳酸氢钠 磷酸二氢钠等等

这个无机盐在这里有几个作用

主要是调节细胞的渗透压

还有某些酶的活性

以及溶液的酸碱度

细胞培养还需要一类物质谷氨酰胺

谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质所必需的

如果谷氨酰胺缺乏

会导致细胞生长不良

甚至死亡

通常在培养液中

谷氨酰胺的含量是1到4个毫摩尔每升

谷氨酰胺在溶液中很不稳定

4度放置一个星期可以分解50%

所以我们应该单独配置放于-20度保存

在临用之前加入到培养液里面

我们做细胞培养

通常使用的完全培养基

所以完全培养基的组成是包括

基础培养基 血清 还有双抗溶液

基础培养基的比率是80%到95%

血清是占比5%到20%

双抗溶液的浓度是

青 链霉素各一百个单位每毫升

这个知识点我们就介绍到这里