卵巢培养与应用在线视频

各位同学好

今天我们来学习一下卵巢培养与应用

主要包括以下内容

卵巢结构与功能调控

卵巢功能体外研究方法

卵巢培养方法与观察

卵巢培养的注意事项

用途及局限性等

首先来看卵巢结构与功能

卵巢是女性重要的生殖内分泌器官

主要功能是产生卵子和分泌女性激素

成年卵巢内含有发育至不同阶段的卵泡

卵泡是卵巢的基本结构和功能单位

由卵母细胞和周围的卵泡细胞构成

按照发育的先后顺序依次分为

原始卵泡 初级卵泡 次级卵泡 窦卵泡和排卵前卵泡

女性生殖系统的周期性变化

主要受下丘脑 垂体 卵巢轴分泌生殖激素的调节

其中卵巢在垂体分泌的促性腺激素的周期性调控下

呈现出周期性的卵泡募集 生长 成熟 排卵和黄体形成等变化

除了主要受到生殖内分泌轴的调控外

体内影响卵巢功能的因素众多

卵巢内外多种神经内分泌激素

生长因子和细胞因子等都会调控卵巢的功能

由于卵巢位于身体内部以及体内环境的复杂性

给卵巢操作和功能研究带来了一定的困难

体外培养

由于具有体系简单 影响因素少 周期短 易于操作和干预等优点

被广泛应用到卵巢功能研究中

常用的体外研究方法有

卵巢培养 卵泡培养

颗粒细胞培养 膜间质细胞培养

卵母细胞和早期胚胎培养等

合理应用多种体外研究方法

有助于深入研究卵巢功能以及

揭示卵巢相关疾病

如早发性卵巢功能不全的发病机制

这一节我们重点介绍一下卵巢培养

根据研究目的可分为胚胎期

新生期卵巢培养以及成年期卵巢组织培养

胚胎13.5天至出生后4天小鼠的卵巢

由于体积较小

可进行体外悬浮培养

营养物质和氧气比较容易渗透入完整的卵巢组织

最长可培养存活至2周左右

成年小鼠和人的卵巢由于体积较大

需要制备成组织切片或分割成小块

才能在体外进行培养

培养液通常为

DMEM/F12添加1mg/ml的牛血清白蛋白

1 mg/ml AlbuMAX II Lipid-Rich BSA

5% 的ITS

100μM的抗坏血酸

和1%的青/链霉素

培养条件为5%CO₂和37℃细胞培养箱

在培养过程中

可以观察到卵巢体积变大

形状变扁

可进一步切片染色

观察卵泡的形成 激活以及早期发育等过程

例如

出生后4天的小鼠卵巢体外培养2周后

可以见到含有两层颗粒细胞的次级卵泡

卵巢培养的注意事项有

一 解剖卵巢时尽量迅速且不要破坏卵巢结构

二 在Cell culture insert内 外侧加培养基时不要产生气泡

三 将卵巢放入Cell culture insert中时卵巢之间不要发生黏连

四 培养期间Cell culture insert内部的液体不要过多

卵巢培养的用途

对不同发育阶段的卵巢进行体外培养

可以用来研究卵巢发育

早期卵泡发育及激素合成分泌等过程

而且体外培养具有操作简便 易于施加干预因素等优点

具体来说

出生前胚胎鼠卵巢培养可用于

卵巢早期发育及生殖细胞发育的研究

新生鼠卵巢培养可用于

原始卵泡组装与形成过程的研究

生后3到4天鼠卵巢培养

可用于原始卵泡激活过程的研究

成年小鼠或人的卵巢组织培养

也可用于体外卵泡激活的研究

另外

卵巢组织培养近年来也应用于雌性生殖毒性评估

用于寻找潜在卵巢毒性物质的

作用靶细胞并研究相关机制

最后讲一下卵巢培养的局限性

体外卵巢培养时间较短

无法完成卵泡发育的全过程

特别是出生后小鼠卵巢培养时

卵泡无法发育到次级卵泡以后的阶段

而且由于失去了生殖内分泌轴的周期性调控

不能完全反映体内卵泡发育的全过程

另外

卵巢体外培养依赖于培养液的成分

不同成分对卵巢存活以及发育潜能存在一定影响

更为合适的卵巢培养条件有待于进一步探索

总结一下

本节主要介绍了卵巢培养的方法 应用以及局限性

大家可以根据研究目的进行选择

谢谢大家