当前课程知识点：临床免疫学检验技术 > 第三章 免疫凝集沉淀试验 > 第一节 免疫凝集试验 > 免疫凝集试验
大家好
我们现在开始讲解
免疫凝集试验
免疫凝集试验它的定义是指
细菌螺旋体和红细胞等颗粒性抗原
或表面包被可溶性抗原
或抗体的颗粒性载体
与相应抗体或抗原
发生特异性反应
在适当电解质存在下
出现肉眼可见的凝集现象
那么凝集试验发展的里程碑有哪些呢
我们来学习一下
早在1896年
Widal就利用伤寒病人血清
与伤寒沙门菌发生特异性凝集
用于有效诊断伤寒病
这个试验目前依然广泛运用于临床
在1900年
Landsteiner发现
某些血浆与红细胞一起会发生凝集现象
但也有的不发生凝集现象
由此发现A、B、O血型
三种血型
在1902年
他的两名学生把实验范围扩大到155人
发现了AB型血型
1927年
兰德斯坦纳与美国免疫学家菲利普·列文
共同发现了血液中的M、N、P因子
从而发现了MN血型和P血型
比较科学完整地解释了某些多次输同型血发生的
溶血反应和妇产科中新生儿溶血症问题
在1930年获得诺贝尔医学及生理学奖
免疫凝集试验原理
细菌
螺旋体或红细胞等颗粒性抗原
在悬液中带负电荷
周围吸附一层与之牢固结合的正离子
外面排列了一层松散的负离子层
构成双层粒子云
在粒子云内界和外界之间的电位差
形成了电位
使得各颗粒相互排斥
当特异性抗体和相应抗原颗粒在
一定PH及适量电解质存在下互补结合时
抗体的桥联作用克服了颗粒表面的Z电位
形成聚集现象
那么直接免疫凝集试验
是指细菌
螺旋体和红细胞等颗粒抗原
在适当电解质参与下直接与相应抗体结合
出现肉眼可见的凝集现象
免疫凝集试验中的抗原称之为凝集原
参与免疫凝集称之为凝集素
反应的抗体常用的试验有玻片法和试管法
玻片凝集试验
为定性的试验方法
一般用已知抗体作为诊断血清
与受检颗粒性抗原如细菌或
红细胞悬液各加1滴于玻片上
混匀
如抗原抗体对应
几分钟即可出现肉眼或低倍显微镜可见的凝集结果
常用于红细胞ABO血型的鉴定
简便快速
敏感性低
临床常用于红细胞ABO血型的鉴定
试管凝集试验
半定量的试验方法
标准定量已知颗粒性抗原与
一系列倍比稀释的受检血清混合
保温后观察每管内抗原凝集的程度
通常以产生明显凝集现象的血清最高稀释度
作为血清中抗体的效价
亦称滴度
简单快速
敏感性低
可因电解质浓度或PH值原因引起非特异性凝集
代表试验为肥达和外斐试验
间接免疫凝集试验
就是指将可溶性抗原或抗体
预先吸附或偶联于与免疫无关
大小适当的颗粒性载体表面
使之成为抗原
或抗体
致敏颗粒
然后与相应抗体
或抗原的作用
在适宜电解质存在条件下
可出现肉眼可见的特异性凝集现象
那么正向间接免疫凝集试验就是指
用已知抗原致敏载体检测标本中的抗体
反向间接免疫凝集试验
用已知抗体致敏载体检测标本中的抗原
间接免疫凝集抑制试验
以已知抗原致敏的颗粒载体
及相应的抗体为诊断试剂
检测标本中是否存在和致敏抗原相同的抗原
先将标本与抗体试剂作用
然后加入致敏载体颗粒
若出现凝集现象
说明标本中不存在相同抗原
抗体与试剂未被结合
因此仍与载体上的抗原作用而发生凝集
如果标本中存在相同抗原
则先将抗体试剂结合
后续加入的致敏颗粒无相应抗体与之反应
凝集现象被抑制
颗粒免疫凝集试验
是指胶乳颗粒凝集试验
明胶颗粒凝集试验
碳颗粒凝集试验及甲苯胺红颗粒凝集试验
协同免疫凝集试验
与间接免疫凝集试验的原理相似
但是他所用载体不同
它所用的载体是
金黄色葡萄球菌细胞壁表面的A蛋白
简称SPA
SPA具有与IgG的Fc段结合的特性
当这种葡萄球菌与IgG抗体通过SPA连接
就成为抗体致敏的颗粒载体
抗球蛋白红细胞免疫凝集试验
是指在间接免疫凝集试验的基础上
进行改进的一种试验方法
由Coombs于1945年建立
故称Coombs试验
检测抗红细胞不完全抗体的一种经典方法
这个Coombs试验又分为直接和间接
那么我们看一下直接Coombs试验
是一种定性检测
用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体
临床用于新生儿溶血症等不完全抗体检测
间接Coombs试验
用于检测游离于血清中的不完全抗体
临床常用于检测母体RhD抗体
自身红细胞免疫凝集试验是指
未经致敏的受检者新鲜红细胞
与抗人O型红细胞的单克隆抗体结合
再连接另一种特异性抗体
检测标本中相应抗原
该抗体能与任何血型的红细胞结合
但不出现凝集现象
将这种抗体与另一种特异性抗体
或者抗原连接成双功能抗体
可以用于检测标本中相应抗原或者抗体
该试验受检标本为全血
临床常用于检测抗人类免疫缺陷病毒抗体
或乙型肝炎病毒表面抗原
其敏感性与间接免疫血凝试验相似
临床常用免疫凝集试验试剂方法学
有哪些特点呢我们来看一下
首先必须使用诊断菌液
菌种应使用标准株
制备菌液时需经无菌试验
证实细菌确已被杀灭
并采用比浊管比浊调整浓度
常用的载体颗粒
是绵羊
家兔
鸡及O型人红细胞
带负电荷
可以物理吸附蛋白质分子的聚苯乙烯胶乳
碳粉粒子
其它对于出现的假阳性结果
要结合临床来判断
影响免疫凝集试验有哪些因素
我们来看一下
首先第一个
制备抗原的细菌种类和数量影响敏感性
商品化的类风湿因子试剂敏感性
存在较大差异
第二个与抗原比例适当的抗体
才能出现肉眼可见的凝集
第三个致敏所用的抗原抗体的纯度
第四个标本无溶血
无污染
新鲜血及合适的试验条件
这一节我们总结一下
讲了免疫凝集实验的原理
特点和影响因素
谢谢大家
-第一章章节作业
-第一节 抗原和抗体
--抗原和抗体
-第二节 抗原抗体结合反应
--抗原抗体结合反应
-第三节 抗体制备
--抗体制备
-第二章章节作业
-第一节 免疫凝集试验
--免疫凝集试验
-第二节 免疫沉淀试验
--免疫沉淀试验
-第三节 临床应用
--临床应用
-第三章章节作业
-第一节 放射免疫试验
--放射免疫试验
-第二节 荧光免疫试验
--荧光免疫试验
-第三节 酶免疫试验（上）
-- 酶免疫试验（上）
-第四节 酶免疫试验（下）
--酶免疫试验（下）
-第五节 化学发光免疫试验（上）
-第六节 化学发光免疫试验（下）
-- 化学发光免疫试验（下）
-第四章章节作业
-第一节 流式细胞分析及分选原理
-第二节 数据的显示与分析
-- 数据的显示与分析
-第三节 流式细胞临床应用
--流式细胞临床应用
-第五章章节作业
- 第一节 固相膜免疫分析技术
-第二节 固相膜免疫分析技术临床应用
-第三节 酶及荧光免疫组织化学技术
-第四节 亲和组织化学技术
--亲和组织化学技术
-第五节 免疫电镜技术
--免疫电镜技术
-第六节 影响因素及临床应用
-- 影响因素及临床应用
-第六章章节作业
-第一节 免疫浊度自动化分析
-第二节 发光免疫测定的自动化分析
-第三节 荧光免疫测定的自动化分析
-第四节 酶联免疫测定的自动化分析
-第七章章节作业
-第一节 免疫细胞分离
--免疫细胞分离
-第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
-第三节 抗原提呈细胞的表面标志
-第四节 淋巴及其它免疫细胞功能检测技术
-第五节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
-第八章章节作业
-第一节 细菌真菌感染
--细菌真菌感染
-第二节 病毒感染
--病毒感染
-第三节 其他病原体感染
--其他病原体感染
-第九章章节作业
