当前课程知识点：临床免疫学检验技术 > 第四章 免疫标记试验技术 > 第五节 化学发光免疫试验（上） > 化学发光免疫试验（上）
大家好今天我们开始讲第五节
化学发光免疫试验
化学发光免疫试验
是继放射免疫试验酶联免疫试验
荧光免疫试验之后
发展起来的一种新型标记免疫技术
它是一种基于检测光学信号
将光信号检测的高敏感性
与免疫分析的高特异性融为一体
用于检测微量抗原
或抗体的标记免疫分析技术
它的特点是高特异性高敏感性
快速高度自动化
这是两款经典的
目前临床广泛使用的化学发光仪
罗氏的411雅培的I2000
这是几种标记检测技术灵敏度比较的柱状图
从这个图上可以看出来
化学发光免疫试验的灵敏度是最高的
酶免疫试验的灵敏度是最低的
目前临床最常用的是化学发光试验
检测肿瘤标记物及含量非常低的激素类
而酶免疫试验主要用于初筛或科研方面
它的发展历程
从这张表中
我们可以看出免疫试验的发展历程
放射免疫试验的发现
在免疫试验史上树立了一座里程碑
之后迅速发展
1977年化学发光免疫试验技术的出现
尤其是1990年
电化学发光试验技术的出现
迅速成为临床主流的检测技术
有意思的是1983年出现的
时间分辨荧光免疫试验技术
在电化学发光免疫出现后迅速被淘汰
目前临床应用非常稀少
而1997年出现的流式荧光发光法
目前正在发展中
它的方法学评价
从这个方法学评价的图中
可以看出
化学发光以其灵敏度高
特异性强试剂稳定
线性范围宽
快速而迅速成为三甲医院临床应用
最广泛的检测方法
化学发光的原理是
基态物质吸收了化学反应中
所产生化学能使分子激发
产生能级跃迁
释放能量产生光子导致发光
化学发光有哪些种类呢
接下来我们看看化学发光的分类
发光的定义是
一种分子或原子中的电子吸收能量后
由基态
也就是较低能级
跃迁到激发态
就是较高能级
再返回到基态时释放光子的过程
表现为光的发射
那么根据行程激发态分子的能量来源不同
我们又分为
光照发光生物发光化学发光
光照发光
这张旭日初升的美丽的风景图
可以诠释什么叫光照发光
它的发光剂
是经短波长的入射光照射后
跃迁到激发态
再回到基态
发出较长波长的可见光
而生物发光夏夜的萤火虫
同学们看过吧
黑夜中一闪一闪的黄色光
非常美丽的一道风景
从这个原理图可以看出
萤火虫的荧光素在荧光素酶的催化下
利用ATP能
生成激发态氧化荧光素
在回复基态的时候
多余的能量以光子释放出的光
第三种化学发光
物质吸收氧化还原反应过程中
产生的能量后产生的光的辐射现象
与荧光发光的区别
与形成激发态分子的激发能不同
荧光吸收了光能使分子激发而发射的光
化学发光是吸收了化学反应中产生的化学
能使分子激发而发射的光
化学发光产生的条件有什么呢
一个化学反应要产生发光现象
必须满足以下条件
第一个该反应必须有足够的激发能
并由某一步骤单独提供
第二个有利的反应过程
使化学反应能量能被至少一种物质接受
并生成激发态
第三个
激发态分子必须有一定化学发光效率
或有转移分子间激发态的能力
化学发光免疫试验的非均相分离方式
有4种
固相分离过滤分离
珠式分离及磁颗粒分离
下面我们来讲第一个分离方式固相分离
固相分离是通过免疫反应
而使标记的免疫复合物固相在反应载体中
再通过冲洗的方式分离游离标记物的方法
应用于板式或管式的化学发光免疫分析系统
第二个过滤分离免疫反应完成后
标记的免疫复合物和游离的标记物混合物
放置到专用过滤杯中冲洗
标记的免疫复合物因为分子量大
而被留在过滤膜表面
游离的标记物则方便地滤过滤膜
多次冲洗就达到了分离的目的
第三个珠式分离
将聚苯乙烯制成小珠
在小珠上包被抗原和抗体
经抗原抗体反应后
达到将结合状态和游离状态标记物
进行分离的目的
第四个磁颗粒分离
抗原或抗体包被磁颗粒
与标本中的相应抗体或抗原
和酶标抗体或抗原通过一定模式的免疫反应后
最终通过磁场将结合标记物
免疫复合物和游离标记物进行分离
那么化学发光免疫试验的分类
我们再看一看
根据化学发光方式不同可以分为四类
直接化学发光酶促化学发光
电化学发光发光氧通道
从这张表中我们可以看出
发光剂各不相同
直接化学发光用的是吖啶酯
酶促化学发光用的是
碱性磷酸酶辣根过氧化酶
而电化学发光则用的是三联吡啶钌
发光氧通道用的是感光微粒
反应模式均为夹心法和竞争法
相比较而言
直接化学发光电化学发光和发光氧通道
三种类型反应速度快影响因素少
而检测成本以电化学发光和直接化学发光为高
光信号的模式也不相同
电化学发光为电激发闪光
直接化学发光为闪光
发光氧通道为激发光
而酶促化学发光的光信号为辉光
本节我们一起学习了化学发光的发展历程
方法学评价
化学发光试验的分类
到这里就结束
谢谢大家
-第一章章节作业
-第一节 抗原和抗体
--抗原和抗体
-第二节 抗原抗体结合反应
--抗原抗体结合反应
-第三节 抗体制备
--抗体制备
-第二章章节作业
-第一节 免疫凝集试验
--免疫凝集试验
-第二节 免疫沉淀试验
--免疫沉淀试验
-第三节 临床应用
--临床应用
-第三章章节作业
-第一节 放射免疫试验
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-第二节 荧光免疫试验
--荧光免疫试验
-第三节 酶免疫试验（上）
-- 酶免疫试验（上）
-第四节 酶免疫试验（下）
--酶免疫试验（下）
-第五节 化学发光免疫试验（上）
-第六节 化学发光免疫试验（下）
-- 化学发光免疫试验（下）
-第四章章节作业
-第一节 流式细胞分析及分选原理
-第二节 数据的显示与分析
-- 数据的显示与分析
-第三节 流式细胞临床应用
--流式细胞临床应用
-第五章章节作业
- 第一节 固相膜免疫分析技术
-第二节 固相膜免疫分析技术临床应用
-第三节 酶及荧光免疫组织化学技术
-第四节 亲和组织化学技术
--亲和组织化学技术
-第五节 免疫电镜技术
--免疫电镜技术
-第六节 影响因素及临床应用
-- 影响因素及临床应用
-第六章章节作业
-第一节 免疫浊度自动化分析
-第二节 发光免疫测定的自动化分析
-第三节 荧光免疫测定的自动化分析
-第四节 酶联免疫测定的自动化分析
-第七章章节作业
-第一节 免疫细胞分离
--免疫细胞分离
-第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
-第三节 抗原提呈细胞的表面标志
-第四节 淋巴及其它免疫细胞功能检测技术
-第五节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
-第八章章节作业
-第一节 细菌真菌感染
--细菌真菌感染
-第二节 病毒感染
--病毒感染
-第三节 其他病原体感染
--其他病原体感染
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