当前课程知识点：临床免疫学检验技术 > 第四章 免疫标记试验技术 > 第六节 化学发光免疫试验（下） > 化学发光免疫试验（下）
大家好
接下来我们详细讲述一下
这几种类型的原理
首先第一个
直接化学发光免疫试验
是用化学发光剂比如说吖啶酯
直接标记抗原或抗体的免疫分析方法
吖啶酯在含H2O2的强酸
强碱激发底物的作用下
快速发光激发发光程序简单
速度快背景低
但是吖啶酯在缓冲液中不稳定
易水解影响试剂的稳定性
代表仪器雅培西门子的仪器
异鲁米诺
发光过程和原理与吖啶酯完全相同
但激发发光速度更快
在3秒内完成整个过程
测试速度最快
克服了吖啶酯在缓冲液中不稳定易水解的缺点
第二酶促化学发光
利用酶对发光底物催化作用而直接发光
通过光强度的测定而直接进行定量
酶促法特点有
激发发光时间长测试速度慢
酶易受环境温度的影响
试剂的稳定性不如直接化学发光好
它的代表仪器是
美国贝克曼公司的一款
电化学发光免疫试验
在电极表面由化学引发的特异性化学发光反应
与一般化学发光的差异性在于
电化学是由电启动发光反应
而一般化学发光是通过
化合物简单混合启动的发光反应
电化学发光系统特定项目试剂为
三联吡啶钌标记的抗体
生物素化合的抗体
链霉亲和素磁性微粒
系统试剂有三丙胺溶液和洗涤液
电化学发光原理是什么你
让我们看一下
在电极阳极表面
三联吡啶钌 N羟基琥珀酰胺酯和三丙胺
同时失去电子发生氧化反应
二价的三联吡啶钌标记物
被氧化成三价的三联吡啶钌标记物
2价的标记物被氧化成3价的标记物
三丙胺被氧化成阳离子的自由基
而自由基很不稳定
自发地失去一个质子而形成自由基
另外一个自由基其为强还原剂
将一个电子给3价的三联吡啶钌
使其成为激发态的三联吡啶钌
而TPA自身被氧化成氧化产物
激发态的三联吡啶钌
衰减时发射一个波长620nm的光子
重新形成基态的三联吡啶钌
这一过程中电极表面周而复始进行
产生许多光子
使得光信号增强
电化学发光的特点有以下几点
第一点反应在电极进行
第二点电子供体为三丙胺
第三点化学发光剂为三联吡啶钌
这就是临床广泛使用的电化学发光仪
接下来我们以双抗体夹心法来举例
电化学发光双抗体夹心法步骤
首先第一步试剂或者样本加入反应杯
第一抗体标记生物素
第二抗体标记三联吡啶钌
产生光信号
两种抗体均能与靶抗原特异性结合
生成抗原抗体免疫复合物
第三步加入链酶亲和素包被的磁珠
磁珠直径2.8um表面凸凹
链酶亲和素包被与生物素结合
生物素链酶亲和素特异亲和作用
是目前已知最牢固的非共价生物结合作用
最终在反应杯里形成磁颗粒连接的抗原抗体复合物
第四个发光氧通道免疫试验
感光微粒
是覆盖有亲和素和酞菁染料
的乳胶聚苯乙烯微粒
可以吸收680nm的光
生成高能单线态氧
那么生物素化抗体就是指
就是指特异的抗体与生物素结合后
形成生物素化抗体
可以与含有亲和素的感光微粒结合
那么发光微粒呢
发光微粒是指含有
烯烃染料和特异性抗体或者抗原
可以与单线态氧反应
放出612nm光信号
复合物释放的化学光
在612nm被氧检测器读取
只有两种离子形成三聚体
才能生成化学光信号
发光氧通道免疫分析特点有
反应时间短均相反应的模式
高灵敏度反应过程逐级放大
迅速提高了灵敏度
第三稳定性好
整个能量的产生
传递和放大过程十分稳定
不易受到pH值离子强度
和温度的影响
目标分子的多样性
可对多种生物分子的测定
如蛋白质多肽酶活性DNARNA等
化学发光免疫试验的临床应用有哪些呢
让我们看一看
首先第一个肿瘤标志物检测
AFP也称甲胎蛋白
原发性肝癌最特异的肿瘤标志物
CEA癌胚抗原
增高多见于结肠癌患者
CA125主要是糖链抗原CA125
最可靠的卵巢癌诊断指标
细胞角蛋白19片段
这个是非小细胞肺癌抗原
用来诊断非小细胞肺癌
SCC是鳞状细胞癌相关抗原
NSE是神经元特异性烯醇化酶
主要是小细胞肺癌检出阳性率高
那么第二个就是甲功系列
T3三碘甲状原氨酸
作用与靶器官的主要甲状腺激素
T4甲状腺素
主要用来诊断甲亢甲低
FT3游离三碘甲状原氨酸
TSH促甲状腺激素
甲状腺功能的初筛试验
TG-Ab抗甲状腺球蛋白抗体
增高见于慢性桥本氏甲状腺炎
TPO-Ab抗甲状腺过氧化物酶抗体
第三性激素系列
PRL就是泌乳素
FSH就是促卵泡生成素
LH促黄体生成素
还有就是睾酮孕酮雌二醇等等
影响化学发光免疫试验的主要因素有哪些
让我们看一看
第一个就是标本
标本前处理有没有溶血
保存条件怎么样都会影响
第二试剂
批间差保存条件
第三其它
比如说温度pH抗凝剂或者防腐剂
金属离子等等
那么我们来总结一下我们前面学的
化学发光免疫试验的发展历程
非均相分离方式及方法学评价
化学发光免疫试验的类型
及各型原理与特点
临床应用及影响因素
这一章化学发光免疫实验到此结束
谢谢大家
-第一章章节作业
-第一节 抗原和抗体
--抗原和抗体
-第二节 抗原抗体结合反应
--抗原抗体结合反应
-第三节 抗体制备
--抗体制备
-第二章章节作业
-第一节 免疫凝集试验
--免疫凝集试验
-第二节 免疫沉淀试验
--免疫沉淀试验
-第三节 临床应用
--临床应用
-第三章章节作业
-第一节 放射免疫试验
--放射免疫试验
-第二节 荧光免疫试验
--荧光免疫试验
-第三节 酶免疫试验（上）
-- 酶免疫试验（上）
-第四节 酶免疫试验（下）
--酶免疫试验（下）
-第五节 化学发光免疫试验（上）
-第六节 化学发光免疫试验（下）
-- 化学发光免疫试验（下）
-第四章章节作业
-第一节 流式细胞分析及分选原理
-第二节 数据的显示与分析
-- 数据的显示与分析
-第三节 流式细胞临床应用
--流式细胞临床应用
-第五章章节作业
- 第一节 固相膜免疫分析技术
-第二节 固相膜免疫分析技术临床应用
-第三节 酶及荧光免疫组织化学技术
-第四节 亲和组织化学技术
--亲和组织化学技术
-第五节 免疫电镜技术
--免疫电镜技术
-第六节 影响因素及临床应用
-- 影响因素及临床应用
-第六章章节作业
-第一节 免疫浊度自动化分析
-第二节 发光免疫测定的自动化分析
-第三节 荧光免疫测定的自动化分析
-第四节 酶联免疫测定的自动化分析
-第七章章节作业
-第一节 免疫细胞分离
--免疫细胞分离
-第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
-第三节 抗原提呈细胞的表面标志
-第四节 淋巴及其它免疫细胞功能检测技术
-第五节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
-第八章章节作业
-第一节 细菌真菌感染
--细菌真菌感染
-第二节 病毒感染
--病毒感染
-第三节 其他病原体感染
--其他病原体感染
-第九章章节作业
