当前课程知识点：临床免疫学检验技术 > 第六章 固相膜及免疫组织化学技术 > 第六节 影响因素及临床应用 > 影响因素及临床应用
大家好
我们来学习本章最后一节
影响因素及临床应用
通过之前的学习
大家已经清楚了各种技术的优缺点和干扰因素
在临床工作中
我们要掌握不同因素对技术的影响
主要的影响因素有
第一个影响因素是标本的处理
主要包括两部分
第一部分是标本的主要来源
标本来源主要有活体组织
各种体液及穿刺液培养细胞
不同的标本来源
应该有不同的处理方式
第二部分是标本的固定与保存
首先大家要明确
标本固定的目的
是为了使细胞内蛋白质凝固
细胞内分解酶反应终止
以防止细胞自溶
保持细胞形态和结构
还可以保存组织细胞抗原性
防止标本脱落和除去妨碍抗体结合的类脂
便于保存
最终抑制组织中细菌的繁殖
防止组织腐败
和在后续组织制备中的细胞结构和成分的改变
面对这么多的固定剂
那么我们应该怎样选择呢
如果是蛋白质类抗原
可以用乙醇或甲醇固定
如果是微生物抗原
可以用丙酮或三氯化碳固定
如果需要除去病毒的蛋白质外壳
可以使用胰蛋白酶
如果有多糖类抗原
可以用10%福尔马林固定
或以微火加热固定
如果有粘液物质存在
应该使用透明质酸酶等处理除去
如果面对类脂质丰富的组织进行蛋白
多糖抗原检测时
需要用到有机溶剂
处理除去类脂
有了合适的固定剂
接下来我们应该思考
怎样选择制片方式
冰冻和石蜡切片
是免疫组化最常用的制片方法
他们当中又怎样选择呢
为了使抗原达到最大限度的保存
首选的制片方法是冰冻切片
其操作简便
可避免石蜡切片因固定
脱水浸蜡等对抗原所造成的损失
适合用于不稳定的抗原
石蜡切片是研究形态学的主要制片方法
它不但是观察组织细胞结构的理想方法
而且可用在
陈旧石蜡包埋材料免疫组化的回顾性研究
切片薄而有连续性
可长期保存
但对抗原的保存不如冰冻切片
第二个影响因素是抗原的保存与修复
临床上包括有酶消化法
盐酸水解法 微波法
高压锅法 煮沸法
第三个影响因素是抗体的处理与保存
抗体应该怎样选择呢
应注意选择具有高度特异和稳定的抗体
根据需要决定采用单克隆或多克隆抗体
抗体应该怎样稀释呢
抗原抗体反应要求有合适的比例
过量或不足均不能达到预期结果
最后抗体怎样保存呢
在保存抗体时
要特别注意保持抗体的生物活性
防止抗体蛋白质变性
第四个影响因素是免疫组化的结果判断
每次实验都应该设立对照组
包括阳性对照和阴性对照
还可以通过其他试验
比如空白试验 替代试验
吸收试验或阻断试验均为确证试验
阳性结果怎样判断呢
阳性细胞的显色可以是位于细胞质
细胞核和细胞膜表面
免疫组织化学的呈色深浅
可以反映抗原存在的数量
可以作为定性定位和定量的依据
阳性细胞可以呈散在
灶性和弥漫性分布
而阴性结果及抗原不表达的情况是
阴性结果不能简单地认为具有否定意义
因为阳性表达有强弱多少之分
哪怕只有少数细胞呈阳性
也视为阳性表达
免疫组化结果与HE切片结果应该怎样分析
当免疫组化检查结果与HE切片
诊断不一致时应综合分析
不能简单地用免疫组化结果推翻HE切片结果
同时大家要注意
特异性和非特异性显色的鉴别
可以根据分布位置和显色强度进行鉴别
第五个影响因素是质量控制
主要包括三方面
首先是试剂质量控制
包括抗体的质量
合适的稀释度 稀释剂
孵育温度和孵育时间等
其次是操作过程质量控制
包括实验操作和标本的质量控制
最后是技术设备
仪器和器具的质量控制
指的是需定期对相关设备
仪器和器具进行校准
同时需要对操作相关工具如吸管
试管 加样枪等需进行消毒
最后我们来习免疫组织化学技术的临床应用
首先大家来学习
荧光免疫组织化学技术的应用
包括第一在自身免疫性疾病中的应用
例如自身免疫性疾病患者中
检测组织中的自身抗体
补体荧光法等
可检测免疫复合物沉积
在组织器官细胞上的位置
对于了解肾小球性肾炎
类风湿关节炎病变侵犯
和病变基础与程度极有帮助
第二细菌和病毒的快速鉴定
例如在细菌学诊断方面
可用于淋病双球菌
百日咳杆菌
梅毒螺旋体等的快速诊断
免疫荧光技术在病毒诊断领域应用更为广泛
可用于病毒和病毒抗原感染细胞内的定位
也可用于病毒感染过程的研究
第三寄生虫的检测与研究
比如免疫荧光技术
在寄生虫研究方面应用极广
可用于疟原虫 阿米巴
利什曼 纤毛虫 滴虫
钩虫 绦虫 蠕虫等的诊断工作
近来在血吸虫及疟原虫方面研究较多
诊断效果肯定
血吸虫抗原是用尾蚴和成虫
疟疾抗原采用的是感染的或实验动物的血清
其次是酶免疫组织化学技术的应用
有第一提高病理诊断准确性
第二癌基因蛋白的临床应用
第三对肿瘤细胞增生程度的评价
第四发现微小转移灶
第五在肿瘤分期上的应用
第六指导肿瘤的治疗
那么以后免疫组织化学技术可以怎样发展呢
主要有
第一荧光激活细胞分类仪FACS
第二共聚焦显微镜技术
第三免疫组织化学—显微切割技术
本章的课程学习到这里
谢谢大家
-第一章章节作业
-第一节 抗原和抗体
--抗原和抗体
-第二节 抗原抗体结合反应
--抗原抗体结合反应
-第三节 抗体制备
--抗体制备
-第二章章节作业
-第一节 免疫凝集试验
--免疫凝集试验
-第二节 免疫沉淀试验
--免疫沉淀试验
-第三节 临床应用
--临床应用
-第三章章节作业
-第一节 放射免疫试验
--放射免疫试验
-第二节 荧光免疫试验
--荧光免疫试验
-第三节 酶免疫试验（上）
-- 酶免疫试验（上）
-第四节 酶免疫试验（下）
--酶免疫试验（下）
-第五节 化学发光免疫试验（上）
-第六节 化学发光免疫试验（下）
-- 化学发光免疫试验（下）
-第四章章节作业
-第一节 流式细胞分析及分选原理
-第二节 数据的显示与分析
-- 数据的显示与分析
-第三节 流式细胞临床应用
--流式细胞临床应用
-第五章章节作业
- 第一节 固相膜免疫分析技术
-第二节 固相膜免疫分析技术临床应用
-第三节 酶及荧光免疫组织化学技术
-第四节 亲和组织化学技术
--亲和组织化学技术
-第五节 免疫电镜技术
--免疫电镜技术
-第六节 影响因素及临床应用
-- 影响因素及临床应用
-第六章章节作业
-第一节 免疫浊度自动化分析
-第二节 发光免疫测定的自动化分析
-第三节 荧光免疫测定的自动化分析
-第四节 酶联免疫测定的自动化分析
-第七章章节作业
-第一节 免疫细胞分离
--免疫细胞分离
-第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
-第三节 抗原提呈细胞的表面标志
-第四节 淋巴及其它免疫细胞功能检测技术
-第五节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
-第八章章节作业
-第一节 细菌真菌感染
--细菌真菌感染
-第二节 病毒感染
--病毒感染
-第三节 其他病原体感染
--其他病原体感染
-第九章章节作业
