放射免疫试验在线视频

大家好

今天我们来讲第四章

免疫标记试验

第一节放射免疫试验

放射免疫试验

在科学史上的里程碑式的标志

讲到放射免疫试验

我们不得不提到这样一个科学家

罗莎琳·雅洛

她因与同事合作开发了

针对多肽类激素的放射性免疫分析法

这个试验获得了1977年诺贝尔生理医学奖

成为诺贝尔生理学或医学奖史上第二位女性获奖者

因为发明了放射性免疫分析法

获得1976年的拉斯克基础医学奖

成为历史上第一位获得该奖的女性科学家

放射性免疫试验开创了体液微量物质定量分析 

首先我们来简述一下

用放射性核素标记抗原或抗体分子

通过测定放射性强度评估

抗原抗体反应的情况

从而实现对待测物质的定量或定性分析

将放射性核素的高灵敏度

与抗原抗体间的高特异性结合

开创了体液微量物质定量分析的新纪元

并为建立酶免疫试验化学发光免疫试验

等方法奠定了理论和实践基础

放射免疫分析方法的原理是什么呢

让我们看一下

它主要是基于标记抗原

和待测抗原对同一抗体具有相同亲合力

在抗体限量的情况下

两种抗原与抗体发生竞争性结合

当标本中无待测抗原的时候

抗体全部与标记抗原结合

并存在游离标记抗原

当标本中含有待测抗原的时候

待测抗原与抗体结合致使

标记抗原与抗体结合受到抑制

抑制程度与待测抗原含量呈正比

即待测抗原含量

与最终测量的结合物的放射性强度

呈反比函数关系

方法

是用一系列已知抗原含量溶液作为标准品

分别与定量标记抗原和限量抗体反应

即可获得一条剂量

反应曲线即标准曲线

将未知抗原含量的标本同样操作

测定结合标记物的放射性强度

再通过上述标准曲线

即可获得标本中待测抗原的浓度

那么抗原抗体反应呢

竞争反应方式分它分为两种

一种是平衡法一种是非平衡法

让我们看一下平衡法

平衡法就是指

将标记抗原待测抗原

同时加入含有特异性抗体的检测体系中

那么非平衡法呢

则是将待测抗原优先加入

含有特异性抗体的检测体系中

让待测抗原优先与特异性抗体

结合并达到平衡

然后

再向检测体系中加入标记抗原

标记抗原与剩余的特异性抗体结合

达到平衡

温度和时间可依据待检抗原的

理化性质和所用抗体的亲和力等因素进行选择

若待检抗原性质稳定且含量高

抗体的亲和力较高

温浴时间可较短

反之则应选择低温长时间

那么接下来我们看分离技术

分离技术放射性免疫分析

是在液相环境中进行的竞争性反应

达到平衡后形成的抗原

抗体复合物并不发生沉淀

而结合标记物和游离标记物同时存在于液相中

因此必须将其分离

聚乙二醇法

经典的分离方法这是

聚乙二醇可以破坏蛋白质水化膜

非特异性沉淀大分子蛋白质

小分子蛋白质不发生沉淀

抗原抗体反应后

加入6000D

浓度7%-9%的聚乙二醇

再经离心后小心弃上清

测定沉淀物的含量

双抗体法

第二抗体特异性结合标记物中的第一抗体

并形成共沉淀

但不能结合游离标记抗原

离心后的沉淀为结合标记物 

那么免疫放射分析

主要是1968年由Miles和Hales首创

用放射性核素标记抗体为特征

待测抗原与过量标记抗体

发生非竞争性免疫结合反应

采用固相免疫吸附方式

分离结合标记物和游离标记

常采用固相吸附分离技术

利用聚苯乙烯能够吸附抗体

并保留抗体结合抗原特性

此种抗体能捕获液相中抗原

并于固相材料表面形成复合物

而液相中的未结合物

可以通过洗涤而去除

待测抗原含量与固相材料表面

双抗体夹心复合物的总量

呈正比函数关系

放射性免疫分析

与免疫放射分析的比较

大家可以看一下这张表

从它这个反应的模式还有时间

各个方面可以看一下它的区别与差异

放射性免疫分析与免疫放射分析的临床应用

主要是在于激素水平测定

病原体抗原或抗体测定

肿瘤标志物测定及药物测定

本节讲授了放射性免疫试验的发展历程

原理分类及放射性免疫

与免疫放射分析的区别

谢谢大家