当前课程知识点：临床免疫学检验技术 > 第六章 固相膜及免疫组织化学技术 > 第四节 亲和组织化学技术 > 亲和组织化学技术
大家好
我们继续来学习第四节
亲和组织化学技术
亲和组织指的是一些具有双价或多价结合力的物质
如植物凝集素
生物素和葡萄球菌A蛋白
也就是我们常说的SPA等
对某种组织成分具有高亲和力的特点
可以与标记物如荧光素 酶 同位素
铁蛋白及胶体金等结合
采用荧光显微镜
酶加底物的显色反应
放射自显影或电子显微镜
在细胞或亚细胞水平进行对应亲和物质的定位
定性或定量分析
日常我们常见的亲和组织化学技术有
生物素-亲合素法
葡萄球菌蛋白A法
凝集素法
链霉亲合素-生物素法四种
大家要求重点掌握
链霉亲合素-生物素法
首先来学习生物素-亲合素法
生物素-亲合素法包括三种技术
第一种是亲合素-生物素-过氧化酶复合物技术
指的是按一定比例将亲合素与酶标生物素结合
形成可溶性亲合素-生物素－过氧化物酶复合物
我们也简称为ABC
当其与检测反应体系中的生物素化抗体
或生物素化第二抗体相遇时
ABC中末饱和的亲合素结合部位
即可与抗体上的生物素结合
使抗原抗体反应
与ABC标记体系连成一体进行检测
下图是亲和组织化学ABC直接法的原理示意图
第二种是桥联亲合素-生物素技术
该技术不同于ABC法
是以游离的亲合素作为桥联剂
利用亲合素的多价性
将检测反应体系中抗原
生物素化抗体复合物
与标记生物素联结起来
达到检测反应分子的目的
第三种是标记生物素-抗生物素技术
指的是以标记亲合素直接
与免疫复合物中的生物素化抗体
连接进行检测
这种技术具有相当高的灵敏度
由于省略了加标记生物素步骤
操作较BRAB法简便
特别是间接LAB法采用的是
生物素化的第二抗体
可以进一步提高检测灵敏度
接下来我们来学习葡萄球菌蛋白A法
简称SPA法
首先大家要知道葡萄球菌A蛋白
是存在于葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白
根据SPA能与多种动物IgG的Fc段结合的原理
用SPA标记物
显示抗原与抗体结合反应的免疫检测实验
SPA具有和人及多种动物如豚鼠
兔 猪 犬 小鼠
猴等IgG结合的能力
可解决不同动物样本检测时
需分别标记相对应的二抗的问题
SPA结合部位是Fc段
这种结合不会影响抗体的活性
第三种是凝集素法
凝集素可采用直接法和间接法进行细胞化学染色
直接法指的是将标记物直接结合在凝集素上
使其与组织细胞相应的糖蛋白或糖脂相结合
间接法指的是先将凝集素与组织细胞膜糖基结合
然后再用标记的抗凝集素抗体
与结合在细胞上的凝集素反应
第四种是链霉亲合素-生物素法
链霉亲合素简称SA
是从链霉菌培养物提取的一种纯蛋白
不含糖基
有4个生物素结合位点
并且具有高度的亲和力
其功能类似亲和素
我们利用生物素结合的二抗
与酶标记的链霉亲和素蛋白
就构成了酶标链霉亲合素-生物素方法
本节课程学习到这里
好 谢谢大家
-第一章章节作业
-第一节 抗原和抗体
--抗原和抗体
-第二节 抗原抗体结合反应
--抗原抗体结合反应
-第三节 抗体制备
--抗体制备
-第二章章节作业
-第一节 免疫凝集试验
--免疫凝集试验
-第二节 免疫沉淀试验
--免疫沉淀试验
-第三节 临床应用
--临床应用
-第三章章节作业
-第一节 放射免疫试验
--放射免疫试验
-第二节 荧光免疫试验
--荧光免疫试验
-第三节 酶免疫试验（上）
-- 酶免疫试验（上）
-第四节 酶免疫试验（下）
--酶免疫试验（下）
-第五节 化学发光免疫试验（上）
-第六节 化学发光免疫试验（下）
-- 化学发光免疫试验（下）
-第四章章节作业
-第一节 流式细胞分析及分选原理
-第二节 数据的显示与分析
-- 数据的显示与分析
-第三节 流式细胞临床应用
--流式细胞临床应用
-第五章章节作业
- 第一节 固相膜免疫分析技术
-第二节 固相膜免疫分析技术临床应用
-第三节 酶及荧光免疫组织化学技术
-第四节 亲和组织化学技术
--亲和组织化学技术
-第五节 免疫电镜技术
--免疫电镜技术
-第六节 影响因素及临床应用
-- 影响因素及临床应用
-第六章章节作业
-第一节 免疫浊度自动化分析
-第二节 发光免疫测定的自动化分析
-第三节 荧光免疫测定的自动化分析
-第四节 酶联免疫测定的自动化分析
-第七章章节作业
-第一节 免疫细胞分离
--免疫细胞分离
-第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
-第三节 抗原提呈细胞的表面标志
-第四节 淋巴及其它免疫细胞功能检测技术
-第五节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
-第八章章节作业
-第一节 细菌真菌感染
--细菌真菌感染
-第二节 病毒感染
--病毒感染
-第三节 其他病原体感染
--其他病原体感染
-第九章章节作业
