10.4 增加和减少验证相结合在线视频

同学们

大家好

我叫罗自强

来自中南大学基础医学院

在这一讲里面

我们将和大家一起讨论

技能型研究的第二个策略

增加和减少验证相结合

也就是我们通俗所说的

加减验证相结合

这种加减验证

我们可以在器官水平 细胞水平

甚至分支水平

分别进行

比如说在器官水平

我们想研究甲状腺的功能

最传统的做法

就是把甲状腺切掉

然后观察动物

所产生的一系列的表现

而这一些表现我们通常认为

是因为没有甲状腺

然后再反推甲状腺的功能

你比如说我们把甲状腺切掉以后

这个动物的基础代谢率下降了

这就提示甲状腺具有

升高调节基础代谢率的作用

这就是把它减掉

那么这么一个实验

是不是就能够确认

甲状腺参与基础代谢率的调节

我们说为了确认它

我们还希望做另外一个实验

那就是把甲状腺再移植回来

如果甲状腺再移植回来的话

切掉甲状腺所表现出来的

一系列的表现

都由此全部消除了

那我们就能够得到一个肯定的结论

比如说把甲状腺移植回来了

基础代谢率恢复正常了

那我们就说甲状腺的的确确

具有调节基础代谢率的作用

当然

我们还可以采取另外一种方式

再把它补回来

你比如说我们不是

把一个甲状腺移植回来

而是把甲状腺在体外

我们分离它的活性物质

把这个核心物质把它补回来

如果也能够消除甲状腺摘除

所带来的一系列的不利的影响

这也说明甲状腺具有这么个作用

而且进一步的说明甲状腺里面

与它的作用相关系的物质

就是你分离到的

这么一种生物活性物质

好了

那么这个就是我们讲的是先去掉

再补回来

从正反两个方面来进行验证

这就是一个典型的加减验证

这种加减验正

在机能学研究里面是反复使用的

一个非常常用的一个研究的策略

因为从正反两个方面来进行

那么同样的我们在细胞水平

也能进行这样的

你比如说当我们给予

要研究某一个酶的作用的时候

我们通常给予酶的激动剂

也给予酶的抑制剂

我们看看它对机体有什么样的影响

从理论上来说

给予激动剂产生的效应

和给予阻断剂

所产生的效应是不一样的

当然我们也可以

在受体水平来进行研究的话

你比如说给予受体的激动剂

给予受体的拮抗剂

分别观察它的效应

我们想研究每个通道的功能

我们可以把通道打开

用通道开放剂

也可用通道的阻断剂来进行

总而言之正反两个方面来共同进行

当然在基因水平

我们也能这样做

在基因水平

我们可以在整体情况下面来进行

你比如说在整体情况下面

进行基因敲除

我们举个例

比如说敲除了动物的

孕激素的受体以后

观察它对乳腺的影响

首先我们来看这么一个实验结果

这是一个正常的动物

它的乳腺除了导管以外有很多腺泡

然后我们把老鼠的

孕激素的受体敲大了以后

就可以发现它的导管

乳腺的导管还存在

但是腺泡没有了

这就说明乳腺腺泡的发育

依赖于孕激素受体的存在

也就是依赖于孕激素的调节

那我们再来看

这是一个实验

它把正常动物的卵巢切掉了以后

为什么把正常动物的卵巢切掉

因为我们知道体内的孕激素

主要来自于卵巢

我们发现当卵巢切掉了以后

它在乳腺的只有导管了

腺泡也没有了

不发育了

当然对于卵巢切掉了以后

这么一个正常的老鼠

你给它补雌激素孕激素

它的乳腺的发育又恢复正常

那我们再来看这里

如果我们把孕激素敲除的老鼠

把它卵巢切掉了以后

依然是只有导管

没有腺泡

但是在这个动物身上

你去给它进行补充雌孕激素的时候

没有作用

那这个实验说明什么

这么一个实验就说明

孕激素对于乳腺腺泡的发育依赖于

孕激素的受体

那么这些都是把它敲掉

把它减少

那有没有可能我们刚才讲的上的多了

也可以

我们再来看

这是正常的老鼠

把卵巢切掉了以后

乳腺有导管

但是腺泡的发育几乎没有

那么这么一个动物

它是一个孕激素受体的过表达的动物

它的机体里边孕激素的受体是增加的

是过表达的

我们可以发现

当它把卵巢切出来以后

由于孕激素的受体的个表达

它对于机体里面的低水平的孕激素

依然存在着一定的反应

所以还有一些腺泡的存在

那么这个实验进一步反证了

乳腺腺泡的发育依赖于

孕激素的受体以及

依赖于孕激素的调节

好了

那么这样的话

我们是从正反两个方面

从基因水平演示来进行加减验证

先去掉它 敲掉它

再向它过表达

分别得到相同的结果

相互认证

这个结论就可信了

那么在基因水平

特别在离体实验里面

我们也常常进行挽救实验

这挽救实验是什么意思

我们来看一下

你比如说在这个研究里面

它想研究mir-324-3p

对于肝癌细胞的生长的影响

它分别做了两件事情

第一人为的上这个mir表达增加

当它人为的表达增加了以后

我们来看发现

它对于细胞的生长得到了促进

那就说明这么一个mir-324-3p

是促进肝癌细胞的生长

然后它又人为的把这个细胞

它的表达下调

表达下调了以后

发现肝癌细胞的生长

降低了

肝癌细胞受到了抑制

那么这么一个实验

就说明mir-324-3p

它是可以促进肝癌细胞的生长的作用

多了肝癌细胞长得快

少了肝细胞长得慢

那在这么一个研究里面

为什么会出现这种结果

他们也发现

在它这里一个mir过表达的时候

它肝癌细胞里面有一个基因

表达发生了改变

这个基因减少了

如果我们给予

这么一个mir的移植物的话

这个基因的表达上调了

这么一个研究

这就提示

miR-324-3P它是可以抑制

这么一个基因DACT1

这么一个基因的表达的

那这么一种基因的表达的变化

是不是参与了

这个mir

对肝癌细胞生长的影响

为了验证这个

它做了一个挽救实验

我们来看

这个挽救实验就是这样的

他人为的再把这么一个基因

DACT1的基因把它进行过表达

把它导到肝细胞里面去

导进去的结果

我们就可以发现

它可以消除miR-324-3p

对肝癌细胞的促增效应

以及miR-324-3p

移植物对肝癌细胞生长的抑制效应

那么这么一个挽救实验

它就证明了什么

miR-324-3p是通过抑制

DACT1基因的表达

而达到促进肝癌细胞增殖的目的

所以在这个过程中

我们就可以发现

当人为的把它减少的时候

我们把它补进去

看看会是什么样的结果

这就是在技能学里面经常常用的方法

增加减少

这么一种加减相互验证

一定要得到相一致的结果

这个结论才是真正的可信的可靠的

好了

刚才我们谈到增加减少

相验证可以在器官水平

细胞水平和基因水平

来研究某一个生物活性物质

某一个基因的功能

其实这么一种加减验证

还可以了解某一种物质

在机体里面的重要性

你比如说关于除红细胞生成素

调节红细胞生成的研究

因为我们知道在机体里面

促进红细胞生成的因素

有促红细胞生成素

有雄性激素生长激素

糖质激素等等

有很多激素

那么到底在这里面促红细胞生成素

扮演什么样的角色

它有多大的重要性

我们再来看另外一个加减验证

你比如说在一个肾衰的患者

这个我们知道

除红细胞生成素是来自于肾脏的

肾功能衰竭的患者

除红细胞生成素是明显减少的

它的红细胞的生成是减少的

我们在这里可以看到

对于肾衰的患者

它的体内的血细胞比容是非常低的

尽管你不断地给它输血

血小板比如增高了以后降下来

你再输血增高以后再降下来

这就说明输血是不能真正有效改善

肾衰患者的贫血状态的

但是其实我们也知道

在机体里面虽然没有除红细胞生成素

但是雄性激素依然在

肾上腺皮质激素生长激素这些都在

你现在没有了除红细胞生成素

说机体的红细胞的生存

就出现了严重的抑制

减少

这就证明了除红细胞生成素是

红细胞生成的调节的重要因素

是不是这么回事

那么还要反证

怎么反证在肾衰的病人体内

我们给它除红细胞生成素

给它注射除红细胞生成素了以后

我们就可以发现

它的机体面的红细胞的生成

得到了显著的改善

这就进一步的证明

除红细胞生成素

是机体红细胞生成的最重要的

调节物质

没有它难以维持正常的造血

有了它就可以了

那当然下面这么一个图示表示的

是网织红细胞的数量

我们知道当机体造血增加的时候

网织红细胞会显著增加

那么这个结果也证明了

给它除红细胞生成素以后

为什么红细胞的数量

和血细胞比容上升

是因为造血增加了

那么这么一个实验就证明了

机体里面红细胞的生存

最关键的调节因素

除红细胞生成素

同学们

我们这一讲就介绍到这里

我们下一讲

再见

谢谢大家