当前课程知识点:医学科研设计 > 第十一章 实验结果的专业判断与分析 > 11.1实验结果的专业判定1——实验结果可靠吗 > 11.1 实验结果的专业判定1——实验结果可靠吗
同学们大家好
在这一节里面
我们将和大家一起讨论实验结果的专业判定
这一部分内容
那么当我们完成实验以后
我们获得了大量的实验结果
首先我们要进行统计学的判断
通过统计学的分析
我们就可以知道哪些结果
与对照组相比有差异的统计学意义
但是从另外一个角度来讲
我们还需要对这些结果
进行专业上面的判定
你比如说当我们获得的阳性结果
可靠吗
那么从实验结构专业判定来说
我们将和大家分别讨论这三个问题
第一阳性结果可靠吗
也就是说你所获得的结果是真阳性吗
第二阴性结果可靠吗
也就是说你所获得的阴性结果是真的阴性吗
第三你所获得的结果是不是相互矛盾
那么在相互矛盾的过程中
我们怎么样的去寻找事情的真相
那么有关实验结果的专业判定
我们将分三部分
分别和大家一起讨论
下面我们将和大家讨论的第一个问题是
你的阳性结果可靠吗
要判断这个结果是不是可靠
第一我们必须设立阴性对照
在阴性对照里面
你比如说有没有阴性试剂对照
我们先来看这么一个结构
在这个研究里面
他用了Western Blot方法观察
一个基因叫做RIP3这么一个基因的表达
在这里他获得了一个阳性的结果
另外一方面的话呢
它通过免疫荧光也获得了阳性的结果
那这些阳性结果可靠吗
因为我们知道
无论是Western Blot还是免疫荧光
它都是用抗体去与抗原结合
那么这么一个抗体难道就没有可能
非特异性的结合到组织上吗
那好
为了证明这个他的研究的这个结果的特异性
所以他把这个抗体
预先用这么一个抗原先把它封闭
然后再把它加到这么一个反应体系里面来
我们就可以发现经过封闭了以后
这个抗体一旦被封闭了以后
这个阳性信号就全部消失了
这意味着什么
这就意味着我们这个阳性结果是真阳性结果
第二
那还有没有其他的办法
来证明我们这个结果是真阳性呢
我们再来看
在这里他获得了一个阳性的信号
棕颜色的是阳性信号
请注意
那他为了证明他这个阳性信号是真实的
所以他选用了本身就不含这个基因的
一块组织来进行做研究
发现不含这个抗原的这么一个组织
它得到的结果是阴性结果
而这个WT它含有这个抗原的
它所获得的是阳性结构
那就说明什么
这个阳性结构是真的是真阳性
这是我们要说明的
第一
有阴性对照吗
通过阴性对照就是为了排除假阳性
第二
你的实验结果有没有量效关系
在我们前面的过程中
我们特别反复强调做量效关系
一方面是观察剂量与效应之间的关系
其他还有一个更重要的一个因素
那就是它能告诉我们
这个作用是特异性的还是非特异性的
没有量效关系的阳性结果是
通常认为是非特异性的是不予承认的
所以当我们做不出量效关系的时候
那你这个阳性结果通常不予承认
那么第三一个方面
通过工具药物所获得的阳性结果可信吗
比如说我们想研究某一个药物
它的作用是不是通过某一个受体来起作用
通常的做法是
如果用了这个受体的小分子阻断剂以后
那么这个作用一旦消除了
那么我们就说这个药物的作用
依赖于这个受体
但是请注意小分子的阻断剂
它虽然它是一个受体阻断剂
但是也有可能还有其他的效应
所以我们能不能换另外一种方式
来把这个受体把它阻断呢
比如说用siRNA干扰的方法
我们把这个基因上这个受体的基因
让它不表达把它沉默掉
如果这个时候我们所研究的这个药物
它的作用给消除的话
那也说明这个药物它依赖于这个受体
所以我们用两种不同的方法来进行对照
当然我们也可以在实验的过程中
我们可以用不同的阻断剂来进行
比如说我们来看一下
我们想研究某一个药物
它是不是通过这个受体起作用
刚才也谈到用阻断剂把它阻断
如果这个阻断剂能把它消除掉的话
我们说这个药物
就是通过这社会体系作用的
但是也谈到阻断剂
它除了阻断这个受体以外
它还有其他的效应
我们再来看一个图
你比如说这又是另外一个阻断剂
它与主装机A相比的话
它们共同点是能阻断这个受体
但是也有可能他们还有其他的不同的效应
所以如果我们用
两个不同的阻断剂分别来做实验
如果得到相同的结果
那我们通常认为这两个阻断剂
因为他们共同的地方就是
阻断受体的这一块
好了
那么如果这两个阻断剂都能得到相同的效应
那我们认为这个待测药物
就是通过这个受体来起作用的
如果这两个阻断剂分别引起了不同的效应
那我们通常会认为它的这个效应的阻断
是这两个不同的
他们不同的部分在这里起作用
而不是它们的公共部分
这就是我们所熟用的用几种不同的试剂
来进行阻断
这样的话我们得到的结果将会是更加可信
下面我们以PKC的阻断剂为例
现在我们有两种不同的
PKC的阻断剂我们来看一下
它在这个研究里面
它是想研究在这个细胞培养里面
我们把血清去掉了以后对凋亡的影响
我们请注意
当把血清去掉了以后
我们可以看到细胞的凋亡与对照组相比
它是增加了
但是当我们用了PKC的阻断剂以后
细胞的凋亡显著增加
另外一方面
我们再来看有另外一个PKC的阻断剂
他获得了相同的结果
在这么一个实验就可以说明PKC的集合
它可以抑制血腥剥夺所引起的
H358细胞的凋亡
但是我们再来看另外一个作用
在这里他是想观察两种不同的
PKC的阻断剂对钠钙交换的影响
我们可以发现
用了这种PKC的阻断剂以后
钠钙交换得到了明显的增加
而另外一个PKC的阻断剂
它所获得的结果没有影响
那这么一个实验说明什么
两个不同的PKC阻断剂产生了不同的效应
因此他的结论是这么一个
Staurosporine所引起的
心肌纳钙交换的增强是不依赖于PKC的
这就是说我们为什么
有时候要用两种不同的阻断剂
在这里面我们还要说明一下
有时候两种不同的阻断剂
它虽然产生了不同的效应
也有可能是因为阻断了不同的亚型所致
在这里我们还是以PKC阻断剂为例
在这里PKC阻断剂PKCI
它可以它是一个相对来说是选择性的
它阻断的是PKCα和β
还还另外一个GF
它是一个广谱的阻断剂
它可以阻断PKC的αβδε
好了
那么在这里我们可以发现
选择性的阻断剂对它没有影响
而用了广谱的阻断剂以后
它会产生效应在这里增强了
那这里说明什么呢
这就说明在蛋白激酶C
PKC在这里起作用的是ε优胜
在这里面起作用了
所以不同的阻断剂产生的不同的效应
好了
那么在这里我们所看到的
PKCI这么一种PKC的激动剂
对SP-A基因mRNA表达的一致
它是依赖于这个两个不同的
PKC的压型所接到的
第四我问的结果是不是真的阳性
我们还得有时候要说
你刺激的部位是不是准确
是不是精准
你比如说在这里做神经研究的时候
我们局部刺激核团所引起的效应
那么这么一个效应
是不是核团受刺激的结果呢
我们要回答两个问题
第一个问题是你刺激的核团位置对不对
所以做完实验以后
要对它这个刺激的部位进行精准的定位
证明它位置是对的
那好
还有另外一个问题
你比如说我们在这里用了一个刺激
虽然你刺激到这个核团
它有没有可能这种刺激影响到周边呢
而使得周边的核团受到了刺激
那么换句话说
有没有可能所引起的效应
不是他所真正的受刺激的核团
你想象中的那个核团
还是她扩散影响了周边的核团所致呢
那么这样的话我们必须还要进行精准的回答
怎么回答
他在这个附近放两个监测电极
那么当你给了他影响了以后
刺激给予他以后
我们只记录到的这个核团有影响
而对于周边邻近的核团没有影响
这个时候才能说
我们局部的刺激是精准的
就是我们刺激了我们所说的那么一个核团
最后那我们还要回答一个问题
那就是你所使用的试剂是不是可靠
由于试剂的产品的不纯
有杂质它有异构体
以及我们的试剂在储存过程中的适合
以及我们的试剂在储存过程中
被其他的东西所污染
都会带来实验结果的改变
那么在这里我们就可以看到
这是两个分子
这两个分子它是一个同分异构体
它们的差别就是红色的所示元素
都是一样集团都是一样
就是在不同的部位
那么这样的话带来的结果是不同的
所以我们要问的问题是
你所获得的结果得到了阳性
那你所使用的试剂是否可靠
只有可靠的试剂
你的阳性结果才是真正的可靠
那么针对这个问题
我们有几点建议第一绝不要
不先进行对照实验就启用新的试剂
你比如说抗体
绝不要不先经测序
就使用别人所提供的基因克隆的载体也好
其他也好
另外我们要选择可靠的供应商
当我们的实验结果不稳定的时候
我们要尝试不同的公司的产品
找到原因
那么我们所获得的阳性结果是否真的可靠
请记住
我们必须先回答上面所说的五个问题
然后才来说我们的阳性结构是可靠的
我们这一讲就介绍到这里
我们下一讲
再见
-1.1医学科研的基本程序
--1.1医学科研的基本程序 习题
-1.2实验动物基本知识
--1.2 实验动物基本知识 习题
-1.3科研道德与诚信教育
--1.3 科研道德与诚信教育 习题
-1.4人体实验的伦理原则
--1.4 人体实验的伦理原则 习题
-1.5动物实验的伦理学原则
--1.5 动物实验的伦理学原则 习题
-1.6医学科研项目的选题
--1.6 医学科研项目的选题 习题
-2.1假说的作用与特点
--2.1 假说的作用与特点 习题
-2.2形成假说的思维方式
--2.2形成假说的思维方式 习题
-3.1医学科研的基本要素-被试因素
--3.1医学科研的基本要素-被试因素 习题
-3.2医学科研的基本要素-研究对象
--3.2 医学科研的基本要素-研究对象 习题
-3.3医学科研的基本要素-实验效应
--3.3 医学科研的基本要素-实验效应 习题
-4.1医学科研统计学设计的目的与基本策略
--4.1 医学科研统计学设计的目的与基本策略 习题
-4.2对照原则-对照的意义与形式
--第四章 医学科研设计的统计学原则--4.2 测试
-4.3对照原则-对照的设置与常见错误
--4.3 对照原则—对照的设置与常见错误 习题
-4.4随机、重复、均衡及盲法原则概述
--4.4 随机、重复、均衡及盲法原则概述 习题
-4.5随机原则
--4.5 随机原则
--4.5 随机原则 习题
-4.6重复原则
--4.6 重复原则
--4.6 重复原则 习题
-4.7均衡原则
--4.7 均衡原则
--4.7 均衡原则 习题
-4.8盲法原则
--4.8 盲法原则
--4.8 盲法原则 习题
-4.9科研数据中离群值的识别与处理
--4.9 科研数据中离群值的识别与处理 习题
-4.10科研过程中对P值的正确理解
--4.10 科研过程中对P值的正确理解 习题
-4.11常见的随机化设计
--4.11 常见的随机化设计 习题
-4.12配对、配伍和交叉设计
--4.12 配对、配伍和交叉设计 习题
-5.1实验误差及控制
--5.1 实验误差及控制 习题
-5.2有效数及其处理
--5.2 有效数及其处理 习题
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--6.1 医学形态学研究的基本思路概述 习题
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--6.2 常用生物组织的固定剂 习题
-6.3免疫组织化学染色结果评价与非特异染色的控制
--6.3 免疫组织化学染色结果评价与非特异染色的控制 习题
-7.1基因文库及其应用
--7.1 基因文库及其应用 习题
-7.2组学的研究意义
--7.2 组学的研究意义 习题
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--7.3 蛋白功能研究的基本策略 习题
-7.4蛋白相互作用的研究方法
--7.4 蛋白相互作用的研究方法 习题
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--7.5 基因转录调控研究的基本策略 习题
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--7.6 分子生物学实验微量操作技巧 习题
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--8.1 细胞增殖的研究方法 习题
-8.2细胞凋亡的研究方法
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--8.3 免疫应答简介 习题
-8.4免疫细胞分离技术
--8.4 免疫细胞分离技术 习题
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--8.6 细胞因子检测技术 习题
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--8.7 抗肿瘤研究的基本策略-1 习题
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--8.8 抗肿瘤研究的基本策略-2 习题
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--8.9 抗肿瘤研究的基本策略-3 习题
-8.10抗肿瘤研究的基本策略-4
--8.10 抗肿瘤研究的基本策略-4 习题
-9.1动物实验的一般原则
--9.1 动物实验的一般原则 习题
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-10.3 量效关系和时效关系相结合
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-11.1实验结果的专业判定1——实验结果可靠吗
--11.1 实验结果的专业判定1——实验结果可靠吗 习题
-11.2实验结果的专业判定2——实验结果可靠吗
--11.2 实验结果的专业判定2——实验结果可靠吗 习题
-11.3实验结果的专业判定3——实验结果可靠吗
--11.3 实验结果的专业判定3——实验结果可靠吗 习题
-11.4实验结果的专业分析1——实验结果的解释与结论
--11.4 实验结果的专业分析1——实验结果的解释与结论 习题
-11.5实验结果的专业分析2——实验结果的解释与结论
--11.5 实验结果的专业分析2——实验结果的解释与结论 习题







