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常用生物样品的制备与贮藏

体内样品的种类.png

体液：

血液（血浆、血清、全血）；唾液；脑脊液；胃液；胆汁；乳汁；精液；泪液。

组织：

胃；肠；肝；肾；肺；脑；肌肉；头发等。

排泄物：

尿液；粪便;汗液。

最常用的体内样本是血样，包括全血，血浆或血清；

大多数药物是进入血液循环后产生全身治疗效果；

通过测定血液循环中的药物浓度间接预测药物制剂的临床治疗效果。

体内样品的采集与制备.png

血样副本.png

1. 血样的采集

人：通常从静脉采集血样1～5ml；

动物：采血量不宜超过动物总血量的1/10。

2. 血浆（plasma）的制备

采集的静脉血液中加入抗凝剂，混合后，离心，使与血细胞分离，所得淡黄色上清液即为血浆。

制取的量：约为全血的50%～60%；

抗凝剂：肝素（heparin，最常用的抗凝剂，体内正常生理成分，一般不会干扰药物的测定）、EDTA、枸橼酸盐、氟化钠、草酸等。

3. 血清（serum）的制备

将采集的静脉血液放置30分钟～1h，离心，上层澄清的淡黄色液体即为血清。

血清制取的量：全血的20%～40%。

血浆=血清+纤维蛋白原

药物与纤维蛋白几乎不结合，因此血浆与血清中的药物浓度通常是相同的。

作为血药浓度测定的样品，血浆和血清可任意选用，测定药物浓度的分析方法也可相互通用。

由于血浆制取的量多于血清，多数研究者使用血浆样品。

若血浆中含有的抗凝剂干扰药物测定时，应使用血清样品。

4. 全血（whole blood）的制备

将采集的血液中加入抗凝剂, 不经离心操作，保持血浆和血细胞混合在一起

尿样.png

1. 尿样的特点：

药物以原形或代谢物及其缀合物等形式排出；

尿液中药物浓度较高；

收集量可以很大。

2. 尿样的采集：

尿液浓度变化较大，应测定一定时间内排入尿中的药物总量；

测定规定时间内采集的尿液（时间尿）体积和尿药浓度。

唾液.png

一些药物的唾液浓度与血浆浓度相关。

样品易得，取样无损害。

1. 唾液及其组成

唾液是由腮腺、舌下腺和颌下腺分泌汇集而成的混合液体。

其中蛋白质总量接近血浆蛋白含量的十分之一。

2. 唾液的采集

一般在漱口后15min进行，在安静状态下收集自然流出的唾液。

可采用物理或化学方法刺激，在短时间内得到较大量的唾液。

3. 唾液样品的制备

唾液样品采集后，立即测量其除去泡沫部分的体积，放置分层后，离心取上清液，作为药物浓度测定的样品。

组织样品的制备.png

在测定之前，组织样品首先需均匀化制成水性基质匀浆溶液，然后再用适当方法预处理。

匀浆化操作：组织样品中加入一定量的水或缓冲液，在刀片式匀浆机中匀浆。

体内样品的贮存与处理.png

冷藏与冷冻.png

短期保存：冰箱(4℃)冷藏

长期保存：冷柜(-20℃或-70~-80℃)冷冻，常以小体积分装贮存，以避免反复冻融。

血浆/血清：采血后及时分离，一般最迟不超过2h，分离后再置冰箱或冷冻柜中保存。

尿样：冷藏前应加入防腐剂，抑制细菌生长，保存时间为24~36h。

唾液：冷冻保存时，解冻后应充分搅匀后再用。

去活性.png

血浆、血清等生物样品中常含有一些具有生物活性的酶蛋白，有些待测物，特别是蛋白、多肽、氨基酸、核苷、含内酰胺环抗生素以及含酯键药物等，在采样后可能被这些酶进一步代谢。

保证测定准确性，采样后必须立即终止酶的活性。

常用方法.png

1. 酶蛋白变性失活：液氮速冻，微波照射，匀浆/沉淀，煮沸；

2. 加入酶活性阻断剂：氟化钠、三氯醋酸；

3. 加入抗氧剂：易被氧化样品，如维生素C。

体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

-1.1体内药物分析相关的基础理论概述

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体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

2.体内药物分析相关的基础理论概述

3.生物样品的制备和预处理

4.生物样品分析方法的建立与验证

5.色谱及其联用技术

6.免疫分析法

7.前沿分析技术

8.典型药物的体内分析

9.典型毒物的体内分析

10.典型毒品的体内分析

11.禁毒关键技术虚拟仿真实验

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