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常用的生物样品预处理技术——固相萃取法及其他方法

固相萃取法.png

固相萃取法（solid-phase Extraction）简称SPE。

优点：

大大缩短样品的处理时间；

可避免乳化现象；

便于自动化操作；

缺点：

成本高于液相萃取法。

固相萃取法的原理.png

含药物体内样品通过小柱时，药物及内源性物质因为理化性质的差异，与固定相之间的亲和力不同而实现分离；

洗脱方式：

①冲洗溶剂洗去干扰物，用对药物亲和力更强的溶剂洗脱药物；

②药物直接被洗脱，干扰物保留在萃取柱上。

固相萃取法的装置.png

装置.png

固相萃取柱类型.png

填料种类.PNG

固相萃取法的步骤.png

1.活化：甲醇润湿小柱，活化填料；净化填料；

2.平衡：水/缓冲液冲洗小柱，去除过多的甲醇。但若甲醇含量过低(低于5%)，会导致C18链弯曲折叠，萃取回收率降低；

3.装样：加样，使样品通过小柱，并弃去滤过废液；

4.淋洗：水/缓冲液冲洗小柱，去除内源性及其它干扰物质；

5.洗脱：洗脱溶剂洗脱待测物，收集洗脱液，挥干溶剂备用或直接进行在线分析；

图片2 副本.png

超滤法.png

简便快捷，结果稳定、可靠；

是游离药物分析的首选方法；

尤其适合治疗药物监测（TDM）的血样分析。

是一种膜分离技术；

按照截留分子量的大小，选择半透膜,可分离30~1000kD的可溶性生物大分子；

可将血浆或血清中游离型药物与大分子血浆蛋白、及结合了药物的血浆蛋白分离。

缀合物水解.png

缀合物（conjugate）：药物或其代谢物与体内的内源性物质结合生成的产物。

为了测定尿药总量，需水解缀合物；

目前逐渐趋向于直接测定缀合物的含量。

缀合物水解方法副本.png

1. 酸水解法

强酸，加热；

简便，快速；

有些药物在水解过程中会发生分解；

专一性较差。

2. 酶水解法

葡萄糖醛酸苷酶或/和硫酸酯酶；

条件温和；

专属性强；

水解时间较长；

可能引入黏蛋白。

3. 溶剂解法

溶剂萃取过程中缀合物(尤其硫酸酯)直接分解。

化学衍生化法.png

目的.png

1、使药物变成能被分析的性质；

2、提高检测灵敏度；

3、增强药物稳定性；

4、提高对光学异构体分离的能力。

应用.png

1. 在GC中的应用

(1) 硅烷化：三甲基氯硅烷(TMCS)；

(2) 酰化：三氟乙酸酐(TFAA)；

(3) 烷基化：碘庚烷(C7H15I)；

(4) 不对称衍生化：(S)-N-三氟乙酰脯氨酰氯。

2. 在HPLC中的应用

衍生化的分类：柱前/柱后；在线/离线。

衍生化方法：

(1) 紫外衍生化；

(2) 荧光衍生化；

(3) 非对映体衍生化。

体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

-1.1体内药物分析相关的基础理论概述

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体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

2.体内药物分析相关的基础理论概述

3.生物样品的制备和预处理

4.生物样品分析方法的建立与验证

5.色谱及其联用技术

6.免疫分析法

7.前沿分析技术

8.典型药物的体内分析

9.典型毒物的体内分析

10.典型毒品的体内分析

11.禁毒关键技术虚拟仿真实验

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