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当前课程知识点：体内药物与毒物分析 > 3.生物样品的制备和预处理 > 3.2常用的生物样品预处理技术—蛋白沉淀法及液液萃取法 > html

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常用的生物样品预处理技术——蛋白沉淀法及液液萃取法

体内样品预处理的目的副本.png

1. 使待测组分游离

血浆蛋白结合物；缀合物使待测药物/代谢物释放；测定药物/代谢物总浓度。

2. 满足测定方法的要求

样品介质组成复杂：分离；

待测组分浓度低：浓集。

3. 改善分析环境

防止仪器污染，劣化(去蛋白)；

提高测定灵敏度/选择性；

化学改性(衍生化)。

预处理方法.png

蛋白沉淀法.png

1. 溶剂沉淀法

加入与水混溶的有机溶剂，蛋白析出，并使结合的药物释放；

乙腈，甲醇，丙酮，四氢呋喃等；

血浆/血清与有机溶剂的体积比1∶(2-3)。

2. 中性盐析法

饱和硫酸铵，硫酸钠，硫酸镁，氯化钠等；

血清与饱和硫酸铵溶液的比1∶2。

3. 强酸沉淀法

10%三氯醋酸或6%高氯酸溶液；

血清与强酸的比1∶0.6；

上清液呈强酸性(pH≤4)；

酸性分解的药物不宜用本法。

4. 热凝固法

热变性蛋白质沉淀；

通常可加热到90℃；

方法简单；

只能除去热变性蛋白；

要求待测物热稳定性好。

液相萃取法.png

液相萃取法也称液-液提取法（liquid-liquid extraction， LLE）。

原理：

多数药物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水相的溶解度，而大多数内源性干扰物质是强极性的水溶性物质，因此有机溶剂提取后可除去大部分内源性干扰物质。

优点：

可将大部分内源性杂质去除；

经济实用；

可使样品富集；

可一次进行多个样品萃取。

缺点：

乳化；

污染环境。

萃取溶剂的选取原则.png

（1）对药物分子未电离形式可溶，对电离形式不溶；

（2）沸点低，易挥发；

（3）与水不相混溶；

（4）无毒，不易燃烧；

（5）具有化学稳定和惰性；

（6）不影响紫外检测。

萃取溶剂的用量.png

有机相与水相（体内样品）体积比为1:1~5:1。

体内样品溶液（水相）的pH

列表.png

萃取溶剂的pH.png

生物样品宜在碱性或近中性提取，以减少生物基质中内源性物质（多为酸性）的干扰。

空白血清在pH2、 pH7和pH13三种缓冲液中用乙醚提取，提取液的HPLC图谱(220nm) ：在pH13下提取液中杂质峰最少。

一些药物在碱性下不稳定，则可在中性pH用三氯甲烷和异丙醇提取。

萃取操作方法：副本.png

一般只提取1次。

若提取回收率较低（如低于50%）时，可提取2~3次。

若有脂溶性干扰物，可将提取出的含药有机相再用一定pH的小体积水溶液反提取（back extraction）。

体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

-1.1体内药物分析相关的基础理论概述

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体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

2.体内药物分析相关的基础理论概述

3.生物样品的制备和预处理

4.生物样品分析方法的建立与验证

5.色谱及其联用技术

6.免疫分析法

7.前沿分析技术

8.典型药物的体内分析

9.典型毒物的体内分析

10.典型毒品的体内分析

11.禁毒关键技术虚拟仿真实验

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