html慕课视频播放-体内药物与毒物分析-MOOC慕课视频教程-柠檬大学

当前课程知识点：体内药物与毒物分析 > 4.生物样品分析方法的建立与验证 > 4.3分析方法验证的内容与要求（二） > html

html资料文件与下载

html

分析方法验证的内容与要求（二）

稳定性.png

1、生物样品稳定性

冻融稳定性：在预期的储存温度下保存24h后，室温下自然解冻，再把样品在相同条件下冷冻12 ～ 24h。冻融循环3次以上。

室温放置稳定性：一般考察1个工作日内的稳定性，譬如1、2、4、8或24h，根据生物样品处理过程所需的时间而定。

冰冻稳定性：考察至少从生物样品采集直至分析结束这段时间内,生物样品在低温状态下（-20 ℃或-80 ℃）保存的稳定性。

测定方法：

采用低和高浓度质控样品，在预处理后以及在所评价的条件储存不同时间后立即分析。代入随行标准曲线，每一浓度的均值与标示浓度的偏差应在±15%范围内。

2、储备液稳定性

考察待测药物和内标储备液在室温（至少6h）或者低温条件（如4 ℃或-20 ℃）下存放一段时间后的稳定性。

3、处理后样品的稳定性

生物样品经预处理后置于进样盘进样分析测定，因此应考察此段时间内待测样品的稳定性。

4、样品处理过程中的稳定性

在方法建立的初期，应考察生物样品在一般实验室条件、不同溶剂环境和预处理过程中的稳定性。

光敏感样品：避光保存和操作；

药物对空气中氧不稳定：当需要挥干提取溶剂进行浓缩操作时，应采用氮气流下挥干或抽真空干燥，且溶剂挥干过程不能太久，故宜选易挥发的溶剂做提取溶剂；

药物对热敏感：温度控制；

药物对酸碱敏感：挥干有机溶剂后，残渣用流动相复溶时，宜选用不含酸碱的流动相。

提取回收率.png

提取回收率系指从生物样本介质中回收得到待测物的响应值与标准物质产生的响应值的比值，也称萃取回收率、绝对回收率。

用于评价样品处理方法将生物样品中待测物从生物介质中提取出来的能力。样品处理方法的评价重点在于结果的精密与重现；而非待测物提取的完全与否。

测定法.png

计算提取回收率：

图片4.png

考察提取回收率时，若采用内标法校正，则内标物质应在提取之后、溶剂挥发（如必要）之前加入，以校正由于提取溶剂的挥发、残渣的复溶以及分析测定等非提取过程造成的分析物损失。

当采用内标法测定生物样品时，应同时考察内标物质的提取回收率。其测定法同待测药物提取回收率的测定，但仅需考察1个浓度（即体内样品分析时加入的浓度）至少5个质控样品。

接受标准：

提取回收率应一致、精密和可重现。

高、中浓度的RSD应不大于15%；

低浓度的RSD应不大于20%。

基质效应.png

当采用液相色谱-质谱法（LC-MS）分析生物样品时，分析物与来源于基质的共洗脱物之间在LC-MS接口处可能发生竞争与初级离子反应。

若竞争结果显著的降低（离子抑制）或增加（离子增强）LC-MS接口处分析物离子的生成效率，可发生基质效应，影响测定结果的准确性。

引起基质效应的成分一般为生物样品中大量的磷脂类等内源性物质，也可能是药物的代谢物或伍用药物。

评价基质效应时通常使用至少6批来自不同供体的空白基质，不应使用合并的基质。

绝对基质效应的评价.png

计算分析物和内标的绝对基质效应，可以用基质因子（MF）表示：

MF=1：基质效应不存在；

MF>1：可能存在离子增强；

MF<1：存在离子抑制。

提取回收率与基质效应关系.png

相对基质效应的评价：

进一步将分析物的基质因子除以内标的基质因子，得到经内标归一化的基质因子。从6批基质计算的内标归一化的基质因子的变异系数不得大于15%。

基质效应的消除或降低.png

1）改进前处理方法、纯化样品、尽可能减少最终提取液中的基质成分。

2）应用稳定同位素标记的内标化合物，不但可抵消质谱离子化时的基质效应，还可消除样品前处理过程中的差异，是目前消除基质效应最有效的方法。

3）色谱分离

基质效应主要出现在出峰较早的时间段，因此调整色谱分离条件，使样品峰有较长的保留时间，避开此段时间内出峰，可降低基质效应。

4）质谱分析

基质效应随离子源、离子化模式和仪器的不同而不同。

稀释可靠性.png

当部分试验样品或受试者样品的浓度超过标准曲线的定量上限时，应将试验样品用相应的空白生物基质定量稀释后进行分析。

评价稀释的可靠性时，向基质中加入分析物至高于定量上限浓度，并用空白基质稀释该样品（每个稀释因子至少5个测定值）。准确度和精密度应在±15%之内，稀释的可靠性应该覆盖试验样品所用的稀释倍数。

残留.png

在注射高浓度样品或校正标样后，通过注射空白样品来估计残留，应不超过定量下限的20%，并且不超过内标的5%。

如果残留不可避免，应考虑特殊措施，包括在高浓度样品后注射空白样品，然后分析下一个试验样品。

试验样品分析.png

(一) 分析过程的质量控制

试验样品或受试者样品的分析应在分析方法验证完成以后开始。

同时，在未知样品分析过程中应进行分析方法的质量控制，以保证所建立的方法在实际应用中的可靠性。

每个未知样品一般测定一次，必要时可进行复测。

对于生物等效性试验，建议一名受试者的全部样品在同一分析批中分析，以减少结果的变异。

一个分析批除被分析的未知样品外，还包括空白样品和零浓度样品、至少6个浓度水平的校正标样、至少3个浓度水平质控样品。

质控样品应该分散到整个批中，以此保证整个分析批的准确度和精密度。

(二)用于评价方法重现性的试验样品再分析

在分析方法验证过程中使用的校正标样和质控样品可能无法真实模拟实际试验样品。因此，推荐通过在不同天后，在另外一个分析批中重新分析试验样品，来评价实际样品测定的准确度。

一般应该重新分析10%样品，如果样品总数超过1000，则超出部分重新分析5%样品。

对于至少67%的重复测试，原始分析测得的浓度和重新分析测得的浓度之间的差异应在两者均值的±20% 范围内。

体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

-1.1体内药物分析相关的基础理论概述

html资料文件与下载

html

体内药物与毒物分析课程列表：

1.绪论

2.体内药物分析相关的基础理论概述

3.生物样品的制备和预处理

4.生物样品分析方法的建立与验证

5.色谱及其联用技术

6.免疫分析法

7.前沿分析技术

8.典型药物的体内分析

9.典型毒物的体内分析

10.典型毒品的体内分析

11.禁毒关键技术虚拟仿真实验

html笔记与讨论

也许你还感兴趣的课程: