当前课程知识点：植物组织培养技术 > 3. 植物组织培养快繁技术 > 3.2. 初代培养 > 3.2.初代培养
大家好
植物组织培养快速繁殖技术简称为组培快繁技术
是指利用组织培养的方法在培养瓶内
大量繁殖植物种苗的方法
基本过程通常包括材料的初代培养 继代培养
壮苗生根培养 驯化移栽等阶段
这一讲 我们学习初代培养
第一个环节无菌培养物的建立
1.选取外植体
在组织快速繁殖的应用中外植体选择
以顶芽 腋芽 叶 叶柄
鳞茎 球茎居多
取材时从田间或温室中
生长健壮无病虫害的株上
选取发育正常的器官或组织作为外植体
离体培养易于成功
因为这部分器官或组织代谢旺盛再生能力强
2.外植体灭菌操作
预处理
外植体在接种前先要灭菌
在灭菌前又先要进行预处理
预处理方法是先对植物组织进行修整
掉不需要的部分将留下的植物材料
在流水中冲洗干净
如果材料上灰尘较多可先在有洗涤剂的溶液中清洗
然后置于流水中冲洗干净
经过预处理的植物材料其表面仍有很多真菌和细菌因此还需进一步灭菌
外植体灭菌及接种操作
外植体灭菌是通过化学药剂消除植物材料上的杂菌
是植物组织培养的一个重要环节
接种操作是把灭菌后的材料接入培养基上的过程
这两步的具体操作,在前面已经作了讲述,在这里不再做陈述
首次接种污染率的估算与对策
外植体灭菌的目的是获得无菌且有活力的外植体
无菌是最基本的要求有活性是外植体制备的前提
因此灭菌措施不可能很彻底以致污染率较高
严重时达到100%
那么怎样才能降低首次接种污染率
建议使用小容器多数量尽量分散相互隔离
假定有100块经灭菌的材料
现在接入100支试管每管接1块
1～2周后就会发现许多污染
最后一直没有污染的就得到无菌材料
如果他们能生长 增殖那么就建立了无菌培养系
如果得到5块 没有污染的材料
那么无菌率为5% 污染率为95%
个结果并不算太差这样是否太浪费
其实这样才是最效率有效的办法
污染越严重的材料越要使用这一办法
第二个环节 外植体的培养
1.培养环境控制
要求对培养环境的光照
温度 湿度 氧气等进行控制
光照对培养物的主要作用是诱导效应
诱导植物组织细胞脱分化
与形态建成而并不是提供光合作用的能源
因为最初培养的组织细胞是处在异养条件下的
培养基中已有足够的碳源供利用
但在外植体叶片形成后外植体是可以进行兼养的
般培养期间光照度在1000～5000Lx
每天光照12～16小时
培养室的温度维持在摄氏25左右夜间可稍低
培养室内保持70%～80%的相对湿度
植物组织培养中外植体的呼吸需要氧气
植物组织培养中外植体的呼吸需要氧气
在固体培养中最好采用
通气性好的封口膜瓶盖或瓶塞
2.外植体芽的诱导
初代培养时
常用诱导芽分化培养基
培养基中含有相对较高的
细胞分裂素和较小浓度的生长素
根据初代培养时芽的诱导
育途径可分为下面五种类型
第一种类型是顶芽和腋芽的发育
顶芽和腋芽在离体培养中
中都可被诱导而生长发育
采用外源细胞分裂素可促使顶芽 腋芽及休眠侧芽的
启动生长从而形成一个微型的多枝多芽的小灌木状结构
一些木本植物和少数草本植物可以通过这种方式来进行繁殖
如月季 菊花 香石竹等
这种方法的主要原理是利用细胞分裂素
来抑制植物原有的顶端优势
而使侧芽和顶芽能够共同生长
它不经过发生愈伤组织的发生
所以能使无性系后代保持原品种特性
适宜这种再生繁殖方式的植物在取材时宜选用顶芽
或侧芽做外植体
第二种类型是不定芽的诱导
许多种植物是通过外植体上不定芽的产生
而再生出完整的小植株
在培养中由外植体产生不定芽
通常首先要经脱分化形成愈伤组织
之后经再分化形成器官原基
多数情况下它先形成芽后形成根
诱导再分化得到不定芽后
诱导再分化得到不定芽后
而非反复诱导愈伤组织再培养不定芽
采用这种繁殖方式的植物如非洲菊 草莓等
不定芽的诱导有时在繁殖中
会出现严重的质量问题，这是因为植物在脱分化
形成愈伤组织中可能会出现一些变异
在观赏植物中 有不少遗传学上的嵌合体
如一些带镶嵌色彩的叶子
花 叶子带金边或银边的植物等
在通过不定芽繁殖时
再生植株就失去了这些富有观赏价值的特征
在这种情况下
就必须采用茎尖培养或是腋芽为外植体
第三种类型是体细胞胚状体的发生与发育
体细胞胚状体类似于合子胚但又有所不同
它也通过球形 心形 鱼雷形和子叶形的胚胎发育时期
最终发育成小苗
但它是由体细胞发生的
胚状体可以从愈伤组织表面产生
也可从外植体表面已分化的细胞中产生
或从悬浮培养的细胞中产生
通过体细胞胚状体产生植株有三个显著的优点
由一个培养物所产生的胚状体数目往往比不定芽的数目多
胚状体形成快胚状体结构完整
一旦形成都可能直接萌发形成小植株
而且胚状体本身可以诱导形成次级胚状体而增殖
第四种类型是原球茎的发育
兰科植物的组培过程中
由茎尖或侧芽产生原球茎
原球茎不断增殖逐渐分化成为小植株
球茎最初是兰花种子发芽过程中的一种形态构造
兰花种子萌发初期并不出现胚根只是胚逐渐膨大
以后种皮的一端破裂胀大的胚
呈小圆锥状称作原球茎
因此原球茎可以理解为缩短
呈珠粒状嫩茎器官
培养一定时间后原球茎逐渐转绿
相继长出毛状假根通过进一步培养
使其再生分化形成完整的植株
原球茎本身是可以形成次级原球茎
继代繁殖时将原球茎切割成小块转接到
新的增殖培养基上可诱导出新的次级原球茎
第五种类型像百合 水仙的鳞片
经离体培养后直接或由愈伤组织再生
状体 小鳞茎再发育成小植株
最后我们再从一张图片来归结一下植物组织培养快繁成苗的途径
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础--作业
-1.2. 植物组织培养的类型
-1.2. 植物组织培养的类型--作业
-1.3.植物组织培养的发展简史
-1.3.植物组织培养的发展简史--作业
-1.4. 植物组织培养的应用
-1.4. 植物组织培养的应用--作业
-2.1. 植物组织培养实验室布局
-2.1. 植物组织培养实验室布局--作业
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备--作业
-2.3. 植物组织培养常用仪器
-2.3. 植物组织培养常用仪器--作业
-2.4. 植物组织培养常用器皿
-2.4. 植物组织培养常用器皿--作业
-2.5. 培养基的基本成分及其作用
-2.5. 培养基的基本成分及其作用--作业
-2.6. 培养基的种类
-2.6. 培养基的种类--作业
-2.7. 培养基母液的配制与保存
-2.7. 培养基母液的配制与保存--作业
-2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
--培养基母液的配制
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
-2.9. 培养基的配制与灭菌
-2.9. 培养基的配制与灭菌--作业
-2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.11. 无菌操作
-2.11. 无菌操作--作业
-3.1. 外植体的选择
-3.1. 外植体的选择--作业
-3.2. 初代培养
--3.2.初代培养
-3.2. 初代培养--作业
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养--作业
-3.4. 继代培养
-3.4. 继代培养--作业
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作--作业
-3.6. 试管苗生根
-3.6. 试管苗生根--作业
-3.7. 试管苗驯化与移栽
-3.7. 试管苗驯化与移栽--作业
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽--作业
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径--作业
-3.10. 影响快繁因素的调控
-3.10. 影响快繁因素的调控--作业
-3.11. 污染
--3.11.污染
-3.11. 污染--作业
-3.12. 褐变
--3.12.褐变
-3.12. 褐变--作业
-3.13. 玻璃化
--3.13.玻璃化
-3.13. 玻璃化--作业
-3.14. 体细胞无性系变异
-3.14. 体细胞无性系变异--作业
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施
--3.15.植物组织培养快繁试验方案的设计与实施 .pdf
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施--作业
-4.1. 脱毒苗培育的意义
-4.1. 脱毒苗培育的意义--作业
-4.2. 脱毒的主要方法
-4.2. 脱毒的主要方法--作业
-4.3. 脱毒的其他方法
-4.3. 脱毒的其他方法--作业
-4.4. 脱毒苗的鉴定
-4.4. 脱毒苗的鉴定--作业
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖--作业
-4.6. 甘薯脱毒步骤
-4.6. 甘薯脱毒步骤--作业
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系--作业
-5.1.人工种子
--5.1.人工种子
--人工种子.pdf
-5.1.人工种子--作业
-5.2.试管微茎
--5.2.试管微茎
--试管微茎.pdf
-5.2.试管微茎--作业
-5.3.无糖培养技术
-5.3.无糖培养技术--作业
-考试题1
-参考文献
