当前课程知识点：植物组织培养技术 > 2.植物组织培养的基本设备与基本技术 > 2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌 > 2.10.操作演示2：培养基配制及高压灭菌
培养基是植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基础
是为离体培养材料提供近似活体生存环境条件
主要包括水大量元素微量元素铁盐 有机复合物 糖
凝固剂和植物生长调节剂
培养基的配制是植物组织培养最为关键的一环
关系到外植体是否能够正常生长能否达到预期的目标
在植物组织培养中培养基配制出现的问题较为集中
许多培养实验的失败就是由于培养基的配制出现失误造成的
下面我们以配制500mL MS附加6-BA每升2毫克
NAA每升0.1毫克琼脂0.7%
蔗糖3%pH5.7的培养基为例说明配制方法
第一步计算各种母液的使用量
MS母液用量等于培养基体积除以母液的扩大倍数
这样配制500ml 培养基需要加入各母液的量分别为
10倍大量元素母液150ml
10倍大量元素母液250ml
100倍铁盐母液5ml
100倍微量元素母液5ml
100倍有机物母液各5ml
激素母液使用量按照下式公式来计算
激素母液用量
等于培养基配制量乘以激素使用浓度除以激素母液浓度
这样母液浓度为每毫升0.1毫克的NAA母液需要0.5mL
母液浓度为每毫升1毫克的6BA母液需要1mL
蔗糖的浓度为3%
500毫升培养基中的用量为15g
琼脂的浓度为0.7%
500毫升培养基中的用量为3.5g
第二步添加各种母液
将各种母液从冰箱中拿出
放置于试验台上待母液温度恢复到室温后方可使用
尤其是激素母液如果母液温度没有恢复到室温
就量取激素会是培养基中激素浓度比原来设计的浓度要高
在烧杯中加入约300毫升的蒸馏水
根据计算结果分别量取大量元素母液1
大量元素母液2 铁盐母液
铁盐母液微量元素母液有机物母液加入烧杯中
合均匀置于电炉上加热
第三步添加琼脂蔗糖
分别称取琼脂3.5g蔗糖15g
加入烧杯中在电炉上继续加热
煮沸使琼脂蔗糖溶解
蔗糖容易溶解
琼脂相对较为难溶解
要知道琼脂是否彻底溶解可以把玻璃棒从正在加热的培养基取出
观察玻璃棒上是否有琼脂颗粒
若能观察到颗粒说明还没有彻底溶解需要继续加热溶解
若没有琼脂颗粒则说明琼脂已经完全溶解
在这里需要强调一下琼脂一定要完全溶解
如果溶解不彻底培养基分装后会出现一些瓶中的培养基太软
甚至不能凝固
而一些瓶中培养基太硬都不能正常地使用
最后添加激素母液并补充水分到500毫升的刻度线
第四步调节培养基pH值
在调节pH值前首先要对酸度计进行校正
使用pH6.86和pH4.00两种缓冲液进行校正
将电极从参比液中取出后用蒸馏水冲洗干净
再用滤纸吸去水分
然后将电极插入pH6.86的缓冲液中
按校正键pH自动完成一点校正
然后将电极从pH6.86缓冲液中取出
同样用蒸馏水冲洗再用滤纸吸去水分
然后将电极插入pH4.01的缓冲液中
按校正键进行第二点校正
pH自动完成第二点校正
将电极从缓冲液中取出用蒸馏水冲洗后用滤纸吸去水分
插入培养基中按读数键测定培养基的pH值
用浓度为每升1mol NaOH
或1mol而每升的HCl溶液调pH值
最后将pH调到到5.7～5.8
pH计使用完后用蒸馏水冲洗掉电极上面黏附的培养基
滤纸吸去水分插入参比液中保存并关闭电源
第五步培养基分装
将培养基并迅速分装在培养瓶中
每瓶25mL左右封好瓶口
第六步培养基灭菌
配制好的培养基不可长时间存放
需要尽快进行高压灭菌灭菌后的培养基方可使用
高压灭菌锅的类型较多原理与使用方法大致相同
首先检查锅内水位加蒸馏水至要求水位
并将将需要的灭菌的培养基装入框内放入高压锅中
盖好锅盖并对称地扭紧螺旋关闭放气阀
下一步就要进行高压灭菌锅的参数设置
一般温度设为摄氏121度时间一般设置为20分钟并开始加热
加热使锅内产生蒸气
当压力表指针达到 0.03兆帕时
打开排气阀将冷空气排出
此时压力表指针下降当指针下降至零时再将排气阀关闭继续加热
温度升至设定值后自动恒温恒压定时
时间一到则自动切断电源并鸣笛
灭菌完毕后不可放气减压
否则瓶内液体会剧烈沸腾冲掉瓶塞而外溢
甚至导致容器爆裂
须待灭菌器内压力降至与大气压相等时
也就是压力表指针指向0才可开盖
最后将培养基从高压锅中取出
放置平坦的试验台上待其自然冷却
需要提醒的是如果高压锅设有下排气阀
需要提醒的是如果高压锅设有下排气阀
让少量的水蒸气不断排出
便可使高压锅内温度均衡
也就是国内上 中 下三点地温度一致
就能保证培养基的灭菌效果
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础--作业
-1.2. 植物组织培养的类型
-1.2. 植物组织培养的类型--作业
-1.3.植物组织培养的发展简史
-1.3.植物组织培养的发展简史--作业
-1.4. 植物组织培养的应用
-1.4. 植物组织培养的应用--作业
-2.1. 植物组织培养实验室布局
-2.1. 植物组织培养实验室布局--作业
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备--作业
-2.3. 植物组织培养常用仪器
-2.3. 植物组织培养常用仪器--作业
-2.4. 植物组织培养常用器皿
-2.4. 植物组织培养常用器皿--作业
-2.5. 培养基的基本成分及其作用
-2.5. 培养基的基本成分及其作用--作业
-2.6. 培养基的种类
-2.6. 培养基的种类--作业
-2.7. 培养基母液的配制与保存
-2.7. 培养基母液的配制与保存--作业
-2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
--培养基母液的配制
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
-2.9. 培养基的配制与灭菌
-2.9. 培养基的配制与灭菌--作业
-2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.11. 无菌操作
-2.11. 无菌操作--作业
-3.1. 外植体的选择
-3.1. 外植体的选择--作业
-3.2. 初代培养
--3.2.初代培养
-3.2. 初代培养--作业
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养--作业
-3.4. 继代培养
-3.4. 继代培养--作业
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作--作业
-3.6. 试管苗生根
-3.6. 试管苗生根--作业
-3.7. 试管苗驯化与移栽
-3.7. 试管苗驯化与移栽--作业
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽--作业
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径--作业
-3.10. 影响快繁因素的调控
-3.10. 影响快繁因素的调控--作业
-3.11. 污染
--3.11.污染
-3.11. 污染--作业
-3.12. 褐变
--3.12.褐变
-3.12. 褐变--作业
-3.13. 玻璃化
--3.13.玻璃化
-3.13. 玻璃化--作业
-3.14. 体细胞无性系变异
-3.14. 体细胞无性系变异--作业
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施
--3.15.植物组织培养快繁试验方案的设计与实施 .pdf
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施--作业
-4.1. 脱毒苗培育的意义
-4.1. 脱毒苗培育的意义--作业
-4.2. 脱毒的主要方法
-4.2. 脱毒的主要方法--作业
-4.3. 脱毒的其他方法
-4.3. 脱毒的其他方法--作业
-4.4. 脱毒苗的鉴定
-4.4. 脱毒苗的鉴定--作业
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖--作业
-4.6. 甘薯脱毒步骤
-4.6. 甘薯脱毒步骤--作业
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系--作业
-5.1.人工种子
--5.1.人工种子
--人工种子.pdf
-5.1.人工种子--作业
-5.2.试管微茎
--5.2.试管微茎
--试管微茎.pdf
-5.2.试管微茎--作业
-5.3.无糖培养技术
-5.3.无糖培养技术--作业
-考试题1
-参考文献
