当前课程知识点：植物组织培养技术 > 4. 植物组织培养脱毒技术 > 4.6. 甘薯脱毒步骤 > 4.6.甘薯脱毒步骤
大家好
甘薯属于旋花科甘薯属
是一种具有蔓生习性的多年生草本植物
一般认为起源于南美洲热带地区
属于短日照喜温作物
中国是世界上最大的甘薯生产国
在世界主要粮食作物产量中排名第 7 位
在我国仅次于水稻小麦和玉米居第 4 位
甘薯是无性繁殖作物
容易在体内积累病毒而引起品种退化
甘薯病毒病俗称甘薯花叶病
皱缩病缩叶病等
是我国多数薯区常见的一种病毒
甘薯病毒病在18～22℃时传播最快
靠蚜虫和甘薯粉虱等刺吸口器昆虫传播
带病株与无病株叶片接触摩擦也可以传播病毒
带病株与无病株叶片接触摩擦也可以传播病毒
下面我们介绍一下甘薯茎尖分生组织培养脱毒的方法和步骤
第一步选种催芽剪取壮苗
在决定进行对某个甘薯品种的组培脱毒后
需要提前一个半月左右选取完全符合该品种特性的薯块
在光照培养箱里进行催芽
在种薯出芽后观察所长出的茎叶是否健康
坚决弃掉不健康的甘薯薯块和长出的芽
一定选取粗壮健康的茎芽进行后续工作
第二步剥取茎尖 培养成苗
把上一步剪取下来的健壮茎芽
在超净工作台中进行常规的外植体灭菌并用无菌水冲洗
在菌条件下使用体视显微镜剥取出来茎尖分生组织
将含有1-2个叶原基
大小为0.1-0.3mm的茎尖分生组织切下
放到诱导培养基中进行培养
越1个半月或2个月茎尖分生组织可以长大成苗
在本步中要注意两点
首先，剥取茎尖分生组织的大小要越小越好
尺寸大小等同于包含叶原基的数目
虽然剥取的茎尖分生组织尺寸太小
包含的叶原基也少
后期成苗机率会大大降低
但茎尖分生组织越小包含的叶原基越少
携带病毒几率越低
其次
株系的数量要越多越好
剥取的茎尖分生组织诱导长成的组培苗
每株都称为一个独立的株系
他们中间有原种性好的也有变异较大的
有病毒携带者也有无病毒洁净的植株
增加品系的数量既是为了更好的确保种群遗传基因的完整性
也是为了降低病毒检测后
试管苗全军覆没的可能性
第三步切段繁育 扩增数量
在上步剥取的茎尖分生组织诱导成苗后
需要用一种快速的方法成倍的扩增组培苗的数量
一般方法是把完整的组培苗植株每两至三个茎节切成一段
栽种到新的快繁培养基中
进行培养然后再将长成的新植株重复切断繁殖
一般在首次移栽之前
要进行三到四次的切段扩繁
第四步分子检测初筛病毒
收集各个株系的植物组织样本进行分子检测
即提取样本里的DNA或RNA
采用PCR或RT-PCR的方法
将病毒DNA扩增几百万倍
并采用凝胶电泳成像方式将扩增出的病毒
基因片段展现出来这种方法检测灵敏度好精度高
病毒基本上无所遁形
但因为这种方法步骤较多成本较高速度较慢
操作人员专业性要求也高
在中华人民共和国农业行业标准
NY/T 402-2016
脱毒甘薯种薯苗病毒检测技术规程中
甘薯褪绿矮化病毒SPCSV危害较为严重
采用分子加血清方式检测
甘薯双生病毒sweepoviruses采用分子方式检测
其他四种病毒甘薯羽状斑驳病毒SPFMV
甘薯褪绿斑病毒SPCFV甘薯潜隐病毒SPLV
还有甘薯病毒G SPVG则选择用
操作更加简便的酶联免疫吸附法ELISA来进行检测
第五步血清检测再选病毒
经过分子检测后
检测结果合格的株系继续在切段扩繁的同时
收集植物组织培养的样本
进行酶联免疫吸附法进行病毒检测
即常说的血清ELISA检测
主流的血清检测方法
有双抗体夹心法(DAS-ELISA)和硝化纤维素膜法(NCM-ELISA)
根据NY/T 402-2016标准里按规定需要检测的五种病毒
即甘薯褪绿矮化病毒SPCSV甘薯羽状斑驳病毒SPFMV
甘薯褪绿斑病毒SPCFV甘薯潜隐病毒SPLV
和甘薯病毒G SPVG进行酶联免疫吸附法进行病毒检测
酶联免疫吸附法对实验操作人员的经验性要求较强
第六步移栽出瓶育成壮苗
将经过分子血清病毒检测
结果均为合格的株系从瓶里移出
到组培苗驯化室中去经过一段时间的繁育繁育成健壮的植株
第七步嫁接检测终筛病毒
将组培苗育成的健壮的驯化苗
将采用指示植物嫁接的方法
最后一次进行病毒检测
指示植物选用巴西牵牛
在防虫条件下盆栽的巴西牵牛为砧木
以待检测样品的茎蔓为接穗进行嫁接检测
根据巴西牵牛是否表现花叶
叶片卷曲 明脉 黄化
以及植株矮化等症状判断检测样品是否带有病毒
这个方法的优点在于
几乎所有能够感染甘薯的病毒
均能感染巴西牵牛
均能感染巴西牵牛来
也就是说采用指示植物嫁接法检测甘薯病毒病的种类更加全面
但因其检测灵敏度不如分子和血清检测
且受环境影响因素较多
结果的读取工作对经验性要求也很高
通过最后这一关检测结果合格的株系
才能把它标记为茎尖脱毒苗
到此为止在实验室中进行的脱毒和检测环节也就结束
将把合格株系的驯化苗
入下一个环节进行原种性测试
第八步小批栽种测原种性
将确定脱毒的甘薯株系
每个株系取数十株驯化苗
同期栽入有隔离条件的设施中进行原种性测试
经过层层筛选
仍需进行原种性测试的原因是
因为组培属于人工干预下的无性繁殖
这些人为产物会有一些变异而且变异几乎是无规律可循
所以小批量的栽种观察判断各个株系
地上与地下部表现出是否都符合待测植物样本的特性
如果某个或者某几个株系表现不符合该品种的特性就必须淘汰
最后各个组培品种中优中选优的若干植株
在做完种性鉴定后的次年
在具有隔离条件的繁种大田中进行种苗生产
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础
-1.1. 植物组织培养的概念和理论基础--作业
-1.2. 植物组织培养的类型
-1.2. 植物组织培养的类型--作业
-1.3.植物组织培养的发展简史
-1.3.植物组织培养的发展简史--作业
-1.4. 植物组织培养的应用
-1.4. 植物组织培养的应用--作业
-2.1. 植物组织培养实验室布局
-2.1. 植物组织培养实验室布局--作业
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备
-2.2. 植物组织培养实验室的基本设备--作业
-2.3. 植物组织培养常用仪器
-2.3. 植物组织培养常用仪器--作业
-2.4. 植物组织培养常用器皿
-2.4. 植物组织培养常用器皿--作业
-2.5. 培养基的基本成分及其作用
-2.5. 培养基的基本成分及其作用--作业
-2.6. 培养基的种类
-2.6. 培养基的种类--作业
-2.7. 培养基母液的配制与保存
-2.7. 培养基母液的配制与保存--作业
-2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
--培养基母液的配制
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.8. 操作演示1: 培养基母液的配制
-2.9. 培养基的配制与灭菌
-2.9. 培养基的配制与灭菌--作业
-2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.植物组织培养的基本设备与基本技术--2.10. 操作演示2: 培养基配制及高压灭菌
-2.11. 无菌操作
-2.11. 无菌操作--作业
-3.1. 外植体的选择
-3.1. 外植体的选择--作业
-3.2. 初代培养
--3.2.初代培养
-3.2. 初代培养--作业
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养
-3.3. 操作演示3: 外植体灭菌技术及初代培养--作业
-3.4. 继代培养
-3.4. 继代培养--作业
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作
-3.5. 操作演示4: 继代培养操作--作业
-3.6. 试管苗生根
-3.6. 试管苗生根--作业
-3.7. 试管苗驯化与移栽
-3.7. 试管苗驯化与移栽--作业
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽
-3.8. 操作演示5: 试管苗驯化移栽--作业
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径
-3.9 提高试管苗移栽成活率的途径--作业
-3.10. 影响快繁因素的调控
-3.10. 影响快繁因素的调控--作业
-3.11. 污染
--3.11.污染
-3.11. 污染--作业
-3.12. 褐变
--3.12.褐变
-3.12. 褐变--作业
-3.13. 玻璃化
--3.13.玻璃化
-3.13. 玻璃化--作业
-3.14. 体细胞无性系变异
-3.14. 体细胞无性系变异--作业
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施
--3.15.植物组织培养快繁试验方案的设计与实施 .pdf
-3.15. 快繁试验方案的设计与实施--作业
-4.1. 脱毒苗培育的意义
-4.1. 脱毒苗培育的意义--作业
-4.2. 脱毒的主要方法
-4.2. 脱毒的主要方法--作业
-4.3. 脱毒的其他方法
-4.3. 脱毒的其他方法--作业
-4.4. 脱毒苗的鉴定
-4.4. 脱毒苗的鉴定--作业
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖
-4.5. 脱毒苗的保存与繁殖--作业
-4.6. 甘薯脱毒步骤
-4.6. 甘薯脱毒步骤--作业
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系
-4.7. 甘薯脱毒苗的繁育体系--作业
-5.1.人工种子
--5.1.人工种子
--人工种子.pdf
-5.1.人工种子--作业
-5.2.试管微茎
--5.2.试管微茎
--试管微茎.pdf
-5.2.试管微茎--作业
-5.3.无糖培养技术
-5.3.无糖培养技术--作业
-考试题1
-参考文献
