当前课程知识点：临床科研实验技能 > 第三章 分子生物学常用实验技术 > 3.3 电泳技术 > 3.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作
将电泳制胶用平板玻璃板平放在实验台上
用卫生纸擦净
滴适量植物油至玻璃面板上
涂抹均匀
油层厚薄适中
无油滴（油层过厚容易产生气泡
油层过薄聚丙烯酰胺凝胶不容易从面板上剥离
易导致胶碎裂）
玻璃板左右两侧放置好边条
将凹形玻璃板覆盖在平板玻璃面板上
并对称压好
用夹子固定好边条和玻璃板
透明胶带将玻璃板下侧包裹严实
防止底胶溢出
玻璃板下端两侧用夹子对称加紧
将玻璃板放置备用
聚丙烯酰胺凝胶胶液配制
加入5毫升30%丙烯酰胺液
2.5毫升10× TBE
200微升10%过硫酸铵
双蒸水加至离心管25毫升处
混匀
分装出五分之一配好的胶液
加入适量促凝剂TEMED（约40微升）混匀
倒入玻璃板腔中作为底胶
待凝固后
将剩下配好的胶液加入30微升促凝剂TEMED
混匀后加入玻璃板腔中
轻轻摇晃
排除胶液中气泡
插好样品孔梳齿
固定玻璃板等待凝固
聚丙烯酰胺凝胶凝固后
移去玻璃板固定装置
去除透明胶带
拔出样品孔梳齿
凹形板朝向电泳槽内侧
将其固定在电泳槽上
电泳槽中加入适量1× TBE电泳液
使电泳槽下方缓冲液的液面浸没凝胶玻璃板底部
上部浸没样品孔顶部
将9微升PCR产物
与1微升10× DNA Loading Buffer充分混合均匀
依次加入样品孔中
加入4微升DNA Marker试剂
用于识别目的条带
点样结束后
正确连接电泳槽的正负极
开启电泳仪
设置电泳条件
开始电泳
主要记录实验日期
点样的位置和PCR产物编号
待电泳结束后关闭电泳仪
将玻璃板从电泳槽上取下
把固定液倒入染色盘中
将凝胶从玻璃板中分离到固定液中
放置在水平摇床上
开启水平摇床 速度适中
防止破坏凝胶形状
固定时间为10分钟
固定结束
回收固定液（固定液可反复使用6次左右）
用双蒸水清洗两次 清洗时轻轻摇晃
把废液倒入废液桶中
加入染色液放置在水平摇床上
10分钟后染色结束
回收染色液（染色液可反复使用6次左右）
用双蒸水清洗两次
清洗时轻轻摇晃
把废液倒入废液桶中
加入显色液后放置在水平摇床上
待凝胶上出现清晰条带时停止显色
弃去显色液
用双蒸水多次清洗
银染结束
把废液倒入废液桶中
观察并记录实验结果
实验结束后清洗实验用玻璃板
-1.1 临床科研实验简介
-1.2 医学实验中心基本情况
-1.3 进室流程和管理制度
-1.4 实验总结要点和实验心得
-第1章 习题作业
--第1章 习题作业
-第一章 课件
--第一章 课件
-2.1 科研诚信问题
-2.2 科研诚信与学术规范
-2.3 杜绝科研不端行为
-第2章 习题作业
--第2章 习题作业
-第二章 课件
--第二章 课件
-3.1 分子生物学常用实验技术
-3.2 PCR技术
-3.3 电泳技术
-3.4 蛋白质印迹技术
-第3章 习题作业
--第3章 习题作业
-第三章 课件
--第三章 课件
-4.1 精准医学概述
-4.2 常见遗传病简介
-4.3 精准医学在遗传病中的应用
-第4章 习题作业
--第4章 习题作业
-第四章 课件
--第四章 课件
-5.1 生物信息学概述
-5.2 常用生物信息学数据库
-5.3 常用生物信息学分析工具
-5.4 常用数据库和软件使用
-第5章 习题作业
--第5章 习题作业
-第五章 课件
--第五章 课件
-6.1 细胞培养基本概念
-6.2 细胞培养基本条件
-6.3 细胞培养基本方法
-6.4 细胞培养操作流程
-6.5 细胞冻存、复苏和污染检测
-第6章 习题作业
--第6章 习题作业
-第六章 课件
--第六章 课件
-7.1 细胞凋亡概述
-7.2 细胞凋亡分子机制
-7.3 细胞凋亡的检测
-7.4 细胞凋亡与疾病
-第7章 习题作业
--第7章 习题作业
-第七章 课件
--第七章 课件
-8.1 动物实验设计与应用
-8.2 实验动物分类与选择
-8.3 医学动物实验模型
-8.4 实验动物的伦理与福利
-第8章 习题作业
--第8章 习题作业
-第八章 课件
--第八章 课件
-9.1 免疫组化技术
-9.2 免疫荧光技术
-9.3 酶联免疫吸附技术
-第9章 习题作业
--第9章 习题作业
-第九章 课件
--第九章 课件
-10.1 SCI论文基本知识
-10.2 SCI论文写作
-10.3 SCI论文撰写技巧
-10.4 SCI论文投稿和发表
-第10章 习题作业
--第10章 习题作业
-第十章 课件
--第十章 课件
