当前课程知识点：临床科研实验技能 > 第九章 免疫学实验技术 > 9.1 免疫组化技术 > 9.1 免疫组化技术
同学们好
今天我介绍的这个知识点是
免疫组化
免疫组化又称免疫组织化学
利用抗原与抗体特异性结合的原理
通过化学反应
使标记抗体的显色剂
（如酶 金属离子 同位素）
显色来确定组织细胞内抗原
对其进行定位 定性和定量的研究
免疫组织化学染色
是抗体识别目标抗原的过程
抗体具有高度特异性
只与组织切片上相应的蛋白抗原结合
应用显色检测法即能显示抗原-抗体反应
免疫组化显色方法原理
是酶结合抗体作为底物
在蛋白抗原位点产生色素沉着
免疫荧光是一种荧光检测法
即将荧光染料结合到抗体上
应用荧光显微技术检测
我们可以看到这几个步骤
组织（黄色为目标蛋白）
然后用封闭蛋白
I抗孵育
II抗孵育
ABC复合物（产生色素沉着）
实验流程包括
脱蜡 水洗
细胞通透
封闭内源性过氧化氢酶
抗原修复
封闭非特异性蛋白
一抗孵育
二抗孵育
显色
复染 脱水 透明 封片
观察结果
实验流程
1 脱蜡与水化
将切片置于架子上
依据下列流程依次冲洗
确保抗体等能充分与组织中的
抗原等结合发生反应
2 封闭内源性过氧化氢酶
这一步可以降低内源性过氧化物酶的活性
避免内源性过氧化酶的干扰
3 抗原修复
这一步使细胞中抗原簇重新暴露
常用抗原修复的方法
微波修复 高压修复 胰酶修复
4 封闭非特异性蛋白
这一步目标是避免组织切片上
有些剩余的位点可以与一抗非特异性结合
造成后续结果的假阳性
5 一抗孵育
这一步的目的是与特异结合底物
可识别待检测的物质
6 二抗孵育
它的目的是与一抗结合
并带有可以被检测的标记
7 显色
是复合物的显色
借助于其它某些化学基团的显色作用
8 复染 脱水 透明 封片
它可以形成细胞轮廓
从而更好的对蛋白定位
常用的是苏木素染细胞核
我们可以看到左边是
MUC1（粘蛋白）的石蜡切片
这是人的肺癌组织
右边是膀胱癌（人）的
Pan-Keratin（角化蛋白）石蜡切片
免疫组化的应用
可以广泛应用于组织和细胞抗原的检测
可以针对蛋白质 多肽 氨基酸
多糖 磷脂 受体
酶激素 核酸和病原体等
均可应用相应的特异性抗体进行检测
这个知识点就介绍到这里
谢谢大家！
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-第1章 习题作业
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-第3章 习题作业
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