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6.5 细胞冻存、复苏和污染检测在线视频

下一节:第六章课件

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6.5 细胞冻存、复苏和污染检测课程教案、知识点、字幕

大家好

这一节学习细胞冻存复苏和污染检测

细胞深低温保存的基本原理是

在－80℃以下时

细胞内的酶活性均己停止

即代谢处于完全停止状态

因此可以长期保存

细胞低温保存的关键

在于通过0~20℃阶段的处理过程

在这个温度范围内

水晶呈针状

极易导致细胞的严重损伤

细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融

当细胞冷到零度以下

可以产生以下变化

细胞器脱水

细胞中可溶性物质浓度升高

并在细胞内形成冰晶

如果缓慢冷冻

可使细胞逐步脱水

细胞内不致产生大的冰晶

相反

形成的结晶就大

而大的结晶会造成细胞膜

细胞器的损伤和破裂

细胞慢冻的过程通常是在4℃放置2小时

随后转到－20℃放置2小时

再转到－80℃放置12-24小时

最后转到－196℃的液氮罐储存

现在也有专用的冷冻盒

可以起到缓慢降温作用

只需要将细胞放入冷冻盒后

直接到－80℃放置24小时

再转到－196℃的液氮罐储存

细胞复苏的步骤是

从液氮中取出冷冻管

迅速投入37℃～38℃水浴中

使其融化

尽快用培养液稀释至原体积的10倍以上

采用1000转/分低速离心5分钟

去上清

加新鲜培养液培养刚复苏的细胞

复苏过程应该快速融化

这样可以保证细胞外结晶

在很短的时间内即融化

避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内

形成胞内再结晶对细胞造成损伤

低温保护剂的作用

是可以减轻降温和复温时对细胞的损伤

目前细胞冻存多采用

二甲基亚砜或甘油作保护剂

这两种物质能提高细胞膜对水的通透性

加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外

减少细胞内冰晶的形成

从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤

冻存液是含20%血清培养基

和10% DMSO（或10％甘油）组成

含DMSO的冻存液需要提前配制好备用

临时配制会产热而伤害细胞

我们冻存细胞的目的是什么呢

细胞冻存主要用于生物学的保种

以及干细胞研究和细胞传代培养

那么细胞冻存时

细胞浓度应该多少比较合适

一般来说

冷冻管内细胞数目不少于10的6次方个细胞每毫升

下面介绍细胞培养中常见的污染和检测方法

细菌

真菌和支原体污染是细胞培养过程中最常见的种类

主要污染的原因包括

无菌操作技术不当

操作室环境不好

培养液中加入了污染的血清等等

细菌污染是细胞培养中常见的污染

最常见的细菌有

枯草杆菌

大肠杆菌

假单胞菌

白色葡萄球菌

培养细胞受细菌污染后

肉眼可见培养液变混浊变黄

见左边这张图

污染后的细胞发生病理改变

显微镜下观察

可见胞内颗粒增多

增粗

最后变圆脱落死亡

见右边这张图

真菌污染后

细胞生长变慢

最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡

不同于细菌污染

真菌污染后的培养液是清亮的

显微镜下观察

可见丝状物（见左边图片）

有些真菌开始很像死细胞碎片

呈珊瑚状（见中间图片）

有时可见细丝状的团状漂浮物（见右边图片）

真菌生长的比较慢

不象细菌那么容易被发现

支原体污染表现为

细胞培养液仍清亮但变黄

细胞生长变缓

显微镜下观察

可见部分细胞发生脱落

细胞间隙可见铺满细沙样小点

采用荧光染色法检测

支原体污染的细胞

细胞核外及细胞表面出现蓝色荧光小点和丝状点

左图是正常的细胞核

右图是支原体污染的细胞核

细胞冻存复苏和污染检测这个知识点

我们就介绍到这里

临床科研实验技能课程列表：

第一章临床科研实验实施与总结

-1.1 临床科研实验简介

--1.1 临床科研实验简介

-1.2 医学实验中心基本情况

--1.2 医学实验中心基本情况

-1.3 进室流程和管理制度

--1.3 进室流程和管理制度

-1.4 实验总结要点和实验心得

--1.4 实验总结要点和实验心得

-第1章习题作业

--第1章习题作业

-第一章课件

--第一章课件

第二章临床科研诚信与学术规范

-2.1 科研诚信问题

--2.1 科研诚信问题

-2.2 科研诚信与学术规范

--2.2 科研诚信与学术规范

-2.3 杜绝科研不端行为

--2.3 杜绝科研不端行为

-第2章习题作业

--第2章习题作业

-第二章课件

--第二章课件

第三章分子生物学常用实验技术

-3.1 分子生物学常用实验技术

--3.1 分子生物学常用实验技术

-3.2 PCR技术

--3.2.1 PCR技术概述

--3.2.2 PCR实验流程

--3.2.3 PCR实验操作

--3.2.4 PCR技术类型及应用

-3.3 电泳技术

--3.3.1 电泳技术概述

--3.3.2 常用电泳方法

--3.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作

-3.4 蛋白质印迹技术

--3.4.1 蛋白质印迹概述

--3.4.2 蛋白质印迹实验流程

--3.4.3 蛋白质印迹实验

--3.4.4 蛋白质印迹常见问题分析

-第3章习题作业

--第3章习题作业

-第三章课件

--第三章课件

第四章精准医学与遗传病

-4.1 精准医学概述

--4.1 精准医学概述

-4.2 常见遗传病简介

--4.2 常见遗传病简介

-4.3 精准医学在遗传病中的应用

--4.3 精准医学在遗传病中的应用

-第4章习题作业

--第4章习题作业

-第四章课件

--第四章课件

第五章临床科研中常用数据库和软件使用

-5.1 生物信息学概述

--5.1 生物信息学概述

-5.2 常用生物信息学数据库

--5.2 常用生物信息学数据库

-5.3 常用生物信息学分析工具

--5.3 常用生物信息学分析工具

-5.4 常用数据库和软件使用

--5.4.1 序列查询

--5.4.2 序列比对

--5.4.3 UniProt

--5.4.4 文献检索

--5.4.5 变异查询

--5.4.7 变异解读

--5.4.8 变异预测

-第5章习题作业

--第5章习题作业

-第五章课件

--第五章课件

第六章细胞培养技术

-6.1 细胞培养基本概念

--6.1 细胞培养基本概念

-6.2 细胞培养基本条件

--6.2 细胞培养基本条件

-6.3 细胞培养基本方法

--6.3 细胞培养基本方法

-6.4 细胞培养操作流程

--6.4 细胞培养操作流程

-6.5 细胞冻存、复苏和污染检测

--6.5 细胞冻存、复苏和污染检测

-第6章习题作业

--第6章习题作业

-第六章课件

--第六章课件

第七章细胞凋亡

-7.1 细胞凋亡概述

--7.1 细胞凋亡概述

-7.2 细胞凋亡分子机制

--7.2 细胞凋亡分子机制

-7.3 细胞凋亡的检测

--7.3 细胞凋亡的检测

-7.4 细胞凋亡与疾病

--7.4 细胞凋亡与疾病

-第7章习题作业

--第7章习题作业

-第七章课件

--第七章课件

第八章动物实验技术

-8.1 动物实验设计与应用

--8.1 动物实验设计与应用

-8.2 实验动物分类与选择

--8.2.1 实验动物分类与选择

--8.2.2 动物实验基本操作

-8.3 医学动物实验模型

--8.3 医学动物实验模型

-8.4 实验动物的伦理与福利

--8.4 实验动物的伦理与福利

-第8章习题作业

--第8章习题作业

-第八章课件

--第八章课件

第九章免疫学实验技术

-9.1 免疫组化技术

--9.1 免疫组化技术

-9.2 免疫荧光技术

--9.2 免疫荧光技术

-9.3 酶联免疫吸附技术

--9.3 酶联免疫吸附技术

-第9章习题作业

--第9章习题作业

-第九章课件

--第九章课件

第十章 SCI论文写作与发表

-10.1 SCI论文基本知识

--10.1 SCI论文基本知识

-10.2 SCI论文写作

--10.2 SCI论文写作

-10.3 SCI论文撰写技巧

--10.3 SCI论文撰写技巧

-10.4 SCI论文投稿和发表

--10.4 SCI论文投稿和发表

-第10章习题作业

--第10章习题作业

-第十章课件

--第十章课件

6.5 细胞冻存、复苏和污染检测笔记与讨论

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