当前课程知识点：临床科研实验技能 > 第三章 分子生物学常用实验技术 > 3.3 电泳技术 > 3.3.2 常用电泳方法
同学们好
今天我介绍的这个知识点是
常用的电泳方法
常用的电泳方法主要有核酸电泳分离
包括聚丙烯酰胺凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
蛋白质电泳分离包括
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
等电聚焦电泳
聚丙烯酰胺凝胶双向电泳
聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel electrophoresis PAGE)
是由聚丙烯酰胺聚合成长链
并在交联剂作用下形成网状结构
网孔的大小由聚合物单体浓度
交联剂浓度以及聚合条件所决定
在电泳过程中
聚丙烯酰胺凝胶起到了分子筛效应
通过控制单体浓度或与交联剂的
比例制成不同孔径的凝胶
可用于蛋白质
核酸等分子大小不同物质的分离
这是一个聚丙酰胺凝胶电泳示意图
这个表是DNA在聚丙烯酰胺凝胶中的
有效分离范围
聚丙烯酰胺凝胶是一种由人工合成的凝胶
具有机械强度好 弹性大 透明
化学稳定性高 无电渗作用
设备简单 样品用量小
分辨率高等优点
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶（agarose gel electrophoresis AGE)
是从海藻中分离提取出来的
一种线状高聚物
含有不同浓度的琼脂糖凝胶构成的
分子筛网孔大小不同
适于分离不同浓度范围的核酸
这是一个琼脂糖凝胶电泳示意图
这个表是含有不同量琼脂糖凝胶的
分离范围
琼脂糖凝胶电泳优点是
琼脂糖凝胶结构均匀
含水量大
近似自由电泳
样品扩散度较自由电泳小
琼脂糖透明
无紫外线吸收
电泳后样品可直接用于紫外检测
电泳后区带易染色
样品易洗脱
操作简单
电泳速度快等优点
凝胶电泳的检测灵敏度与
凝胶类型和密度有关
聚丙烯酰胺凝胶检测灵敏度是1－1000 bp
琼脂糖凝胶是0.2－50 kb
聚丙烯酰胺凝胶与琼脂糖凝胶
相比有3个优点
分辨力很强
长度仅仅相差0.2％的DNA分子即可分离
所装载DNA量远远大于琼脂糖凝胶
多达10 μg的DNA可以加样到
聚丙烯酰胺凝胶的
一个标准样品槽（1 cm × 1 mm）
而不致显著影响分辨力
从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA纯度很高
也适用于要求高的实验
我们看这个图的左边是聚丙烯酰胺凝胶
右边是琼脂糖凝胶
聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率
用它分离 检测蛋白质混合样品
主要是根据蛋白质组分的
分子大小和形状以及所带净电荷多少
等因素所造成的电泳迁移率的差别
1967年
Shapiro等人发现
在聚丙烯酰胺凝胶中
加入十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate SDS）
与SDS结合的蛋白质携带有一致的负电荷
在相同的条件下进行电泳
根据它电泳迁移率可检测不同种类的蛋白质
等电聚焦电泳（isoelectric focusing electrophoresis IEF）
是利用在凝胶中加入人工合成的
两性电解质
这两性电解质在电场中
可以形成由阳极和阴极逐渐递增的pH阶梯
待分离两性物质在电泳过程中
被集中在与其等电点相同的pH区域内
不同等电点的待分离物质依据其
等电点的不同进行分离
等电聚焦电泳具有极高的分辨率
可分辨出等电点相差在0.01的蛋白质
聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis 2D-PAGE）
是将IEF和SDS-PAGE结合起来的
一种蛋白质分离技术
根据蛋白质等电点的
不同进行等电聚焦分离
再根据蛋白质的
大小不同进行SDS-PAGE分离
它的优点是可将复杂的
蛋白质混合物分离成上千种蛋白质
实现了高通量和高分辨率的分离
特别适合分离复杂的蛋白组
这个知识点就介绍到这里
谢谢大家！
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-第3章 习题作业
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-第6章 习题作业
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-第七章 课件
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