当前课程知识点：临床科研实验技能 > 第三章 分子生物学常用实验技术 > 3.2 PCR技术 > 3.2.4 PCR技术类型及应用
同学们好
我们今天介绍的这个知识点是
PCR技术类型及应用
首先介绍反转录PCR（reverse transcription PCR, RT-PCR）
什么是反转录PCR（reverse transcription PCR, RT-PCR）呢？
它是将RNA反转录
与PCR过程结合的一种PCR技术
在反转录酶的作用下
以mRNA为模板反转录生成
cDNA为模板进行PCR扩增
可将低丰度的mRNA大量扩增
用于检测及对其功能进行研究
可用于分析基因的转录产物
获取目的基因
合成cDNA探针
以及构建RNA高效转录系统
反转录PCR反转录酶的选择有
Money鼠白血病毒（MMLV）反转录酶
有嗜热微生物热稳定性反转录酶等等
反转录PCR引物的选择
有随机引物
随机引物它适合长的
或具有发卡结构的RNA
有Oligo dT引物
它适用于具有PolyA尾的RNA
另外就是特异性引物
它是与模板序列互补的引物
适用于目的序列已知
实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCRRTFQ PCR）
是目前分子生物学应用的非常多的PCR
它通过荧光染料或荧光标记的
特异性的探针
对PCR产物进行标记跟踪
实时在线监控反应过程
结合相应的软件可对产物进行分析
计算待测样品模板的初始浓度
它有荧光染料法和荧光探针法
巢式PCR（nested PCR）
是使用两对PCR引物扩增完整的
DNA片段
第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似
第二对引物为巢式引物
结合在第一次PCR产物内部
使第二次PCR产物扩增片段短于第一次扩增
它扩增的特异性高
第一次扩增产生了错误片段
则第二次能在错误片段上进行引物配对
并扩增的概率极低
反向PCR（inverse PCR, IPCR）
是对已知DNA片段两侧未知序列进行扩增
和研究的一种特殊PCR方法
主要用于获得启动子序列、定点诱变
在表达载体中引入便签肽段的编码序列
鉴定插入失活基因等
原位PCR（in-situ PCR, ISPCR）
是将PCR与可进行细胞定位的
原位杂交技术相结合的一种技术
在组织切片上或细胞涂片的
单细胞内进行PCR
使靶序列拷贝数增加
再用特异性探针进行原位杂交
对靶序列进行定性 定量和定位分析
它可检测DNA和RNA
将目的基因的扩增与定位相结合
PCR-单链构象多态性（PCR-single strand conformation polymorphism, PCR-SSCP）
是第一种将PCR
与SSCP结合起来检测DNA的技术
先将样品PCR扩增、变性
然后进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
不同构象的等长链DNA电泳和迁移率不同
可将不同DNA分子区分
应用PCR-SSCP单个碱基的
变异也能够检测出来
以前常用于突变检测
PCR-限制性片段长度多态性（PCR-restriction fragment length polymorphism, RFLP）
是用特定的限制酶切割序列时
释放的DNA片段大小
与正常基因组相比会有明显差异
通过电泳检测分析目的基因
的多态性的方法
主要用于分析基因突变
和等位基因多态性
PCR技术在医学领域的应用非常多
包括基因组测序 基因表达
定点突变 检测或者获得目的基因
基因诊断 组织配型及器官移植
法医学和流行病学应用等等
这个知识点就介绍到这里
谢谢同学们！
-1.1 临床科研实验简介
-1.2 医学实验中心基本情况
-1.3 进室流程和管理制度
-1.4 实验总结要点和实验心得
-第1章 习题作业
--第1章 习题作业
-第一章 课件
--第一章 课件
-2.1 科研诚信问题
-2.2 科研诚信与学术规范
-2.3 杜绝科研不端行为
-第2章 习题作业
--第2章 习题作业
-第二章 课件
--第二章 课件
-3.1 分子生物学常用实验技术
-3.2 PCR技术
-3.3 电泳技术
-3.4 蛋白质印迹技术
-第3章 习题作业
--第3章 习题作业
-第三章 课件
--第三章 课件
-4.1 精准医学概述
-4.2 常见遗传病简介
-4.3 精准医学在遗传病中的应用
-第4章 习题作业
--第4章 习题作业
-第四章 课件
--第四章 课件
-5.1 生物信息学概述
-5.2 常用生物信息学数据库
-5.3 常用生物信息学分析工具
-5.4 常用数据库和软件使用
-第5章 习题作业
--第5章 习题作业
-第五章 课件
--第五章 课件
-6.1 细胞培养基本概念
-6.2 细胞培养基本条件
-6.3 细胞培养基本方法
-6.4 细胞培养操作流程
-6.5 细胞冻存、复苏和污染检测
-第6章 习题作业
--第6章 习题作业
-第六章 课件
--第六章 课件
-7.1 细胞凋亡概述
-7.2 细胞凋亡分子机制
-7.3 细胞凋亡的检测
-7.4 细胞凋亡与疾病
-第7章 习题作业
--第7章 习题作业
-第七章 课件
--第七章 课件
-8.1 动物实验设计与应用
-8.2 实验动物分类与选择
-8.3 医学动物实验模型
-8.4 实验动物的伦理与福利
-第8章 习题作业
--第8章 习题作业
-第八章 课件
--第八章 课件
-9.1 免疫组化技术
-9.2 免疫荧光技术
-9.3 酶联免疫吸附技术
-第9章 习题作业
--第9章 习题作业
-第九章 课件
--第九章 课件
-10.1 SCI论文基本知识
-10.2 SCI论文写作
-10.3 SCI论文撰写技巧
-10.4 SCI论文投稿和发表
-第10章 习题作业
--第10章 习题作业
-第十章 课件
--第十章 课件