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6.3 细胞培养基本方法在线视频

下一节:6.4 细胞培养操作流程

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6.3 细胞培养基本方法课程教案、知识点、字幕

大家好

这一节学习细胞培养的基本方法

我们学习培养细胞的方法

首先要了解细胞有哪些生长方式及类型

细胞的生长方式

主要包括贴壁生长和悬浮生长

贴附生长型细胞是

指必须贴附于底物才能生长的细胞

从形态上大体分为

上皮型细胞

成纤维细胞型

游走细胞型

多型细胞型

而悬浮细胞是不需要贴附于底物

呈悬浮状态就可以生长的细胞

上皮型细胞

是起源于内外胚层的细胞

如皮肤表皮及其衍生物

消化管上皮

肝胰

肺泡上皮等

形态类似于体内的上皮细胞

呈扁平不规则多角形

中央有圆形核

上皮型细胞的生长特点是

比较容易连成片生长

细胞彼此紧密相连成单层膜

细胞生长时呈膜状移动

很少有单独行动的细胞

成纤维细胞型是

起源于中胚层间充质组织的细胞

比如成纤维细胞

心肌细胞

平滑肌细胞

内皮细胞

成骨细胞等等

形态是类似于体内的成纤维细胞

胞体呈梭型或不规则三角形

胞质向外伸出2到3个长短不等的突起

中央有卵圆形核

成纤维细胞型的生长特点是

呈放射状或者漩涡状生长

但是并不紧密连成片

细胞和细胞之间的接触也容易断裂

单个游离的成纤维细胞

常常有几个伸长的细胞突起

另外两种类型的细胞

游走细胞型是呈散在生长

一般不连成片

胞质常突起

呈活跃游走或变形运动

细胞不稳定

有时难以和其他细胞相区别

而多型细胞型是一类难以确定

其规律和稳定形态的细胞

如神经细胞等

贴壁细胞的生长过程

主要包括潜伏期

对数生长期

停滞期

潜伏期是指细胞种植到培养瓶后

细胞经历悬浮到贴壁过程

细胞有生长活动

基本无增殖

对数生长期是指细胞数随时间变化成倍增长

活力最佳

最适合进行实验研究

停滞期

也称为平台期

是指细胞长满瓶壁后

细胞虽有活力但不再分裂

机制是细胞存在接触抑制和密度依赖性

因此

细胞在平台期后应及时传代

悬浮生长型细胞主要来源于

血脾或者是骨髓

比如淋巴细胞

悬浮细胞的特点是悬浮生长良好

形态是圆形的

悬浮细胞的优点是由于生存空间大

可以提供比较大量的细胞

另外传代和收获都比较容易

不需要消化

只需要通过离心收集就可以了

但是也有一定的缺点

比如观察不方便

细胞容易游走不固定

悬浮细胞我们可以举个例子

比如KU812

人外周血嗜碱性白细胞

常用的培养基是1640再加10%的血清

细胞形态是圆形的

呈悬浮状

悬浮生长细胞采用离心法传代

细胞经离心后去上清

沉淀物加新培养液混匀

进行传代培养

而贴壁生长的细胞采用酶消化法传代

常用的消化液是0.25％的胰蛋白酶液

下面针对细胞首次传代

我们强调需要注意的几个事项

首先要注意

细胞生长密度不高时

不能急于传代

如果这个时候传代的话

反而影响细胞的生长

其次

原代培养的贴壁细胞

消化时间一定要严格要求

如果消化时间过长

会对细胞造成比较大的损伤

对于贴壁细胞已经消化下来以后

我们要将沉淀的细胞吹散成单个细胞

这个时候一定要轻柔

吹打已消化的细胞应减少机械损伤

而且原代培养细胞首次传代

我们还要注意细胞接种数量要多一些

培养基的pH应适当偏低些

血清浓度可加大至15%～20%左右

细胞培养的基本方法这个知识点

我们就介绍到这里

临床科研实验技能课程列表：

第一章临床科研实验实施与总结

-1.1 临床科研实验简介

--1.1 临床科研实验简介

-1.2 医学实验中心基本情况

--1.2 医学实验中心基本情况

-1.3 进室流程和管理制度

--1.3 进室流程和管理制度

-1.4 实验总结要点和实验心得

--1.4 实验总结要点和实验心得

-第1章习题作业

--第1章习题作业

-第一章课件

--第一章课件

第二章临床科研诚信与学术规范

-2.1 科研诚信问题

--2.1 科研诚信问题

-2.2 科研诚信与学术规范

--2.2 科研诚信与学术规范

-2.3 杜绝科研不端行为

--2.3 杜绝科研不端行为

-第2章习题作业

--第2章习题作业

-第二章课件

--第二章课件

第三章分子生物学常用实验技术

-3.1 分子生物学常用实验技术

--3.1 分子生物学常用实验技术

-3.2 PCR技术

--3.2.1 PCR技术概述

--3.2.2 PCR实验流程

--3.2.3 PCR实验操作

--3.2.4 PCR技术类型及应用

-3.3 电泳技术

--3.3.1 电泳技术概述

--3.3.2 常用电泳方法

--3.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作

-3.4 蛋白质印迹技术

--3.4.1 蛋白质印迹概述

--3.4.2 蛋白质印迹实验流程

--3.4.3 蛋白质印迹实验

--3.4.4 蛋白质印迹常见问题分析

-第3章习题作业

--第3章习题作业

-第三章课件

--第三章课件

第四章精准医学与遗传病

-4.1 精准医学概述

--4.1 精准医学概述

-4.2 常见遗传病简介

--4.2 常见遗传病简介

-4.3 精准医学在遗传病中的应用

--4.3 精准医学在遗传病中的应用

-第4章习题作业

--第4章习题作业

-第四章课件

--第四章课件

第五章临床科研中常用数据库和软件使用

-5.1 生物信息学概述

--5.1 生物信息学概述

-5.2 常用生物信息学数据库

--5.2 常用生物信息学数据库

-5.3 常用生物信息学分析工具

--5.3 常用生物信息学分析工具

-5.4 常用数据库和软件使用

--5.4.1 序列查询

--5.4.2 序列比对

--5.4.3 UniProt

--5.4.4 文献检索

--5.4.5 变异查询

--5.4.7 变异解读

--5.4.8 变异预测

-第5章习题作业

--第5章习题作业

-第五章课件

--第五章课件

第六章细胞培养技术

-6.1 细胞培养基本概念

--6.1 细胞培养基本概念

-6.2 细胞培养基本条件

--6.2 细胞培养基本条件

-6.3 细胞培养基本方法

--6.3 细胞培养基本方法

-6.4 细胞培养操作流程

--6.4 细胞培养操作流程

-6.5 细胞冻存、复苏和污染检测

--6.5 细胞冻存、复苏和污染检测

-第6章习题作业

--第6章习题作业

-第六章课件

--第六章课件

第七章细胞凋亡

-7.1 细胞凋亡概述

--7.1 细胞凋亡概述

-7.2 细胞凋亡分子机制

--7.2 细胞凋亡分子机制

-7.3 细胞凋亡的检测

--7.3 细胞凋亡的检测

-7.4 细胞凋亡与疾病

--7.4 细胞凋亡与疾病

-第7章习题作业

--第7章习题作业

-第七章课件

--第七章课件

第八章动物实验技术

-8.1 动物实验设计与应用

--8.1 动物实验设计与应用

-8.2 实验动物分类与选择

--8.2.1 实验动物分类与选择

--8.2.2 动物实验基本操作

-8.3 医学动物实验模型

--8.3 医学动物实验模型

-8.4 实验动物的伦理与福利

--8.4 实验动物的伦理与福利

-第8章习题作业

--第8章习题作业

-第八章课件

--第八章课件

第九章免疫学实验技术

-9.1 免疫组化技术

--9.1 免疫组化技术

-9.2 免疫荧光技术

--9.2 免疫荧光技术

-9.3 酶联免疫吸附技术

--9.3 酶联免疫吸附技术

-第9章习题作业

--第9章习题作业

-第九章课件

--第九章课件

第十章 SCI论文写作与发表

-10.1 SCI论文基本知识

--10.1 SCI论文基本知识

-10.2 SCI论文写作

--10.2 SCI论文写作

-10.3 SCI论文撰写技巧

--10.3 SCI论文撰写技巧

-10.4 SCI论文投稿和发表

--10.4 SCI论文投稿和发表

-第10章习题作业

--第10章习题作业

-第十章课件

--第十章课件

6.3 细胞培养基本方法笔记与讨论

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