6.2 细胞培养基本条件在线视频

大家好

这一节学习细胞培养的基本条件

我们先复习一下

细胞培养技术是指

在体外模拟体内生理环境

在无菌 适当温度和一定的营养条件下

使细胞生存和生长

并维持其结构和功能特性

从细胞培养的概念中

我们可以知道

细胞培养的基本条件包括

无菌条件和细胞生长条件

细胞培养是一种无菌操作技术

要求工作环境和条件必须保证

无微生物污染和不受其它

有害因素的影响

细胞培养室的设计原则

是防止微生物污染和有害因素影响

要求工作环境清洁

干燥和无烟尘

无菌室的结构

一般由更衣间 缓冲间 操作间

三部分组成

我们在使用无菌室前

要求提前开启紫外灯

照射15-30分钟

进入无菌室前

记得要关掉紫外灯

而且无菌室需要定期采用

甲醛熏蒸和新洁尔灭擦拭地面

的方式进行消毒

我们细胞培养操作

通常是在无菌室里面的超净工作台进行的

超净工作台在使用之前

也需要开启紫外灯

照射10到30分钟

然后预工作10到15分钟

预工作的目的是去除臭氧

使工作台面和空间成一个洁净的状态

而且我们也强调

在使用超净工作台完成以后

一定要用70%的酒精

将台面和台内的四周要擦拭干净

细胞培养除了要求细胞操作的

无菌环境以外

与细胞接触的一切物品

都要经过严格的消毒处理

我们通常是采用湿热消毒和干热消毒

湿热消毒是采用压力蒸汽消毒器

它的压力需要达到15磅

温度是121度

而且要维持20到30分钟以上

才能达到消毒的效果

湿热消毒主要是适用于

培养基 平衡盐

还有一些手术器械等

干热消毒的温度是在160到180度

而且要维持在两个小时以上

才能达到消毒的效果

干热消毒主要是适用于

一些玻璃器皿的消毒

细胞生长的条件包括营养条件和环境条件

细胞生长所需的营养条件主要包括

碳水化合物 氨基酸和脂类

同时还需要一定量的

无机盐 维生素或者是微量元素

细胞生长的环境

是包括温度 气体环境和PH值

通常细胞培养是在37度左右

同时需要有适宜的气体环境

包括95%氧气和5%二氧化碳

氧气是细胞正常代谢所必需的

二氧化碳能够维持细胞培养液的pH值

细胞培养液的pH值通常要求在7.2到7.4之间

细胞培养的常用液体

包括水 平衡盐溶液 pH调节液

消化液 抗生素溶液和培养基

对于细胞培养所用的水

要求很高

必须是纯净的

不含有离子和其他的杂质

通常细胞培养用的水

是三蒸水或者是二蒸水去离子

平衡盐溶液包括

生理盐水 PBS D-Hank's液等等

主要作用是维持细胞的渗透压

pH调节液包括

碳酸氢钠液 HEPES缓冲液

常用消化液有

胰蛋白酶 EDTA 胶原酶

贴壁细胞的消化传代

主要是采用胰蛋白酶或EDTA来消化

如果是组织分离单个细胞

比较常用的是采用胶原酶来消化

抗生素溶液主要是青霉素和链霉素联合使用

培养基包括天然培养基和合成培养基

天然培养基主要是血清和组织提取液

细胞培养用的血清

我们通常采用的是胎牛血清

使用浓度一般是在5%到20%之间

最常采用的血清浓度是10%

这里要强调一下

血清的解冻是不能从-20度

直接拿到室温直接解冻

需要从-20度拿到4度放置一天

然后在室温下全溶后

进行分装或者使用

如果是快速解冻的话

会导致血清中蛋白质凝结而发生沉淀

影响血清的质量

组织提取液

比较常用的是鸡胚和牛胚浸液

合成培养基是指

根据细胞生存所需物质的种类和数量

用人工方法模拟合成的

包括四大类物质

无机盐 氨基酸 维生素 碳水化合物

合成培养基种类有很多

目前常用培养基有

RPMI-1640 DMEM M199 MEM等等

人工合成培养基只能维持细胞生存

要想使细胞生长和繁殖

还需补充一定量的天然培养基

比如血清

细胞培养还需要无机盐

包括氯化钙 氯化钾 硫酸镁

氯化钠 碳酸氢钠 磷酸二氢钠等等

无机盐的主要作用是

调节细胞渗透压

以及某些酶的活性和溶液的酸碱度

细胞培养还需要一类物质谷氨酰胺

谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质所必需的

如果谷氨酰胺缺乏

会导致细胞生长不良甚至死亡

通常在培养液中谷氨酰胺的含量

为1到4个毫摩尔每升

谷氨酰胺在溶液中很不稳定

4℃放置一个星期可以分解50％

因此

通常我们会单独配制200毫摩尔

每升的浓缩液

置于-20℃保存

在临用前加入培养液中

细胞培养通常使用的是完全培养基

组成包括合成培养基 血清

还有双抗溶液

合成培养基的比率是80%到95%

血清占比是5%到20%

双抗溶液的浓度是

青 链霉素各一百个单位每毫升

细胞培养的基本条件这个知识点

我们就介绍到这里