Agilent 1260高效液相色谱仪操作规程资料文件与下载

1开机前准备

1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45 u m滤膜过滤，之后再进行脱气 处理，使用前必须用超声波振荡10-15min，按无机相和有机相分开别装入 溶剂瓶A （装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样 品溶液进样前要经0.45 u m滤膜过滤。

1.2若流动相中含有缓冲盐，则必须以每分钟2〜3滴的速度虹吸10%的异 丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结品在泵头产生而损坏泵头。

2.采样前准备

2.1打开计算机，进入Windows系统，从上到下依次打开各模块电源。

2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进 入化学工作站画面。

2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，也可单击工作站画面 左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。

2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设 定泵〃选项进入泵编辑画面。

2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ， A通道设到100%，单击“确 定”。

2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开” 单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为 止；切换B通道（B通道设到100%）继续Purge直到所有通道管路内均无气 泡为止。（查看柱前压力，若大于lOBar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。）

2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%， B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min， 2分钟后设定至 方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min_o

2.8单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保 护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶 剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。

2.9把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腊/水、甲醇/水或 10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳 定后，打开检测器等，观察基线情况。

3.数据釆集

3.1釆集方法编辑

3.1.1编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数 据分析”外的三项，单击“确定”进入下一画面。

3.1.2方法信息：在“方法注释”栏中加入（如方法的用途等），单击“确 定"进入下一画面。

3.1.3泵参数设定：在“流速”处输入方法所需流量（如Iml/min）；默认 为A为100%，如需二元高压，在“溶剂B"处输入所需比例，则溶剂A=100-B ， 也可“插入” 一行“时间表”编辑二元梯度；在“压力限”处输入柱子的 最大耐高压（建议设定200bar）以保护柱子，单击“确定”进入下一画面。

3.1.4VWD检测器参数设定：在“波长"下方的空白处输入所需的检测波 长，如254nm；在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的 响应吋间（如〉0.1 min （2s））；如有特殊要求，也可在“时间表”中可以“插 入” 一行输入随时间切换的波长（如Imin波长=300nm），点击“确定”。

3.1.5在“运行时选项表”中选中“数据釆集”选项，单击“确定气

3.1.6单击“方法"菜单选中“方法另存为”输入方法名，单击“确定气

3.1.7从“视图”菜单中选中“在线信号”，选中“信号窗口 1"，然后单击“改变”钮，将所要查看的信号移到右边框中，单击“确定”。

3.1.8进样器参数设定：在进样模式中输入“进样量"xxLil，默认为20μL。“标准进针”只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“针清洗后进样” 可以输入进样体积和洗瓶位置为XX，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗 瓶中洗针。

进样器进样程序参数设定：选中使用进样程序，在“函数”中添加相应函 数即可按程序进样。

3.1.9 TCC检测器参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度， 并选中它，右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。

3.2运行方法

3.2.1单针进样

3.2.1.1选择“单针进样”图标。

3.2.1.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入“操作者名称”， 数据存储目录路径中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，输入 后，鼠标点击其他地方，会自动弹出“E： \一不存在，要创建它吗？ ”单 击“确定”。“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。（区别：“手动” --每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉；“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀，如20120505，在“计数器”框中输入 计数器的起始位，仪器会自动命名如2012050500000k 20120505000002等等。）“样品位置”填写进样瓶的位置。

3.2.1.3点击画面中的“开始”运行方法，中间停止釆样点“结束”。

3.2.2序列进样

3.2.2.1 “序列”下“序列参数”，设置同单针进样，样品位置不填。

3.2.2.2 “序列”下选择“序列表”，在表格中可进行“插入”、“剪切”“复 制” “粘贴”“追加行”等操作，表格中必须填写“样品瓶”“样品名称”“方 法名称”“进样次数”“数据文件”“进样量”等信息，其他信息可选择编辑。 编辑完成后，单击“确定”。在“序列菜单中选择“序列模板另存为”为新 建序列命名。

3.2.2.3在“仪器”菜单中选择“运行序列”运行当前序列。停止釆集数据 选择“仪器”菜单中“停止运行/进样/序列”。或者同单针进样的方法。

4.数据分析方法编辑

4.1从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面。

4.2从“文件”菜单选择“调用信号”选中所做的数据文件，单击“确定”， 也可直接双击打开。

4.3做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项"，再从“范围”中选 择“自动量程”及合适的显示时冋单击“确定”或选择“自定义量程"调 整，反复进行直到图的比例合适为止。

4.4积分优化

4.4.1从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，再从菜单中选 “积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”、“峰宽”、“最小峰面积”、 “最小峰高”。

4.4.2从“积分”菜单中选择“积分”选项，贝擞据被积分。

4.4.3如积分结果还不理想，则修改相应的积分参数直到满意为止。

4.4.4单击左边“保存并退出”图标将积分参数存入当前方法中。

5打印报告

5.1从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。

5.2单击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角选中所采用的报告方法（如面积外标法等），单击“确定

5.3从“报告”菜单中选择“打印”则报告打印结果将显示在屏幕上，如 想输出到打印机，则单击“报告”底部的“打印”钮即可。

6关机

6.1关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5-1.0ml/min，再 用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关闭系统。

6.2退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。

6.3关掉主机电源开关。

7注意事项：

7.1氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。

7.2流动相不要使用多日存放的蒸御水（易长菌）。

7.3流速突然突然变大或变小会导致柱压的突然改变，时间久了柱子填料

会坍陷或松动，最终柱压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。