当前课程知识点：分子生物学 > 第十三章 蛋白质印迹 > 第1节 蛋白质印迹概述 > 蛋白质印迹概述
同学们好
我是中南大学湘雅三医院的邓昊
今天我给大家介绍的
这个知识点是
蛋白质印迹概述
印迹是指将样品
转移至相应的固相载体上后
利用相应的探针来检测样本的一种方法
蛋白质印迹是指细胞
或生物组织等
蛋白样品经凝胶电泳分离后转移至固相载体上
而后利用特异性抗体
对目标蛋白进行定量
或定性检测的一种技术
1975年
英国人Edwin Mellor Southern
创建了一个以标记核酸为探针
来检测DNA的杂交技术
命名为Southern Blot
1977年
George Stark及同事
用相同的原理发明了检测RNA的方法
命名为Northern Blot
1979年
George Stark发展了早期的蛋白印迹技术
将蛋白经凝胶电泳分离后
转移至活化的纤维素膜上
1981年
W. Neal Burnette正式将这一技术命名为
Western Blot
这种方法
蛋白质印迹是采用
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样品
以非共价键形式转移到固相载体
如硝酸纤维素薄膜上
以载体上的蛋白质或多肽作为抗原
与一抗作为检测探针与对应的抗原
其免疫反应再与酶
或同位素标记的二抗体起反应
经过底物显色或放射自显影
也检测通过电泳分离的蛋白质产物
先将蛋白样品点在这个胶上
通过PAGE胶
将不同的蛋白样品分离开来
将胶上的蛋白质转移到膜上
通过一抗与对应的蛋白质相结合
二抗带着显色的物质
跟一抗相结合
然后通过显影
把所要检测的蛋白质
显示出来
蛋白质印迹的优点是
将高分辨率的凝胶电泳
和免疫化学分析技术相结合的杂交技术
它具有分析容量大
灵敏度高
特异性强
成本低和效率高等优点
广泛用于蛋白水平的检测
它可以用于蛋白的定量检测
蛋白表达的定位
蛋白表达特异性分析
如磷酸化 乙酰化的
蛋白与蛋白相互作用的鉴定
如与pull down co-IP等相结合
这个知识点就介绍到这里
谢谢大家
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--分子生物学的定义
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