当前课程知识点:临床生物化学检验 > 第五章 自动化分析技术 > 5.3 试剂盒双试剂 > 5.3 试剂盒双试剂
各位同学大家好
各位都有到医院检验科见习的经历
医院检验科的自动化程度非常高
而临床生物化学检验
是在临床检验中
自动化程度最高的部门
在利用自动生化分析仪进行检测时
除了仪器外
还需要一个重要医疗器械
即试剂盒
不同的检验项目需要不同的试剂盒
采用自动生化分析仪进行检测时
一般要求试剂越简单越好
最好将不同试剂
组合形成单一的试剂
这样可以
加快检测速度
但是有时却需要将
试剂巧妙地组合成两个试剂
形成所谓的双试剂
这是为什么呢
今天的课
就是给各位同学
回答这一问题
单一试剂在体外
诊断试剂中应用比较广泛
它是指
试剂盒中
除了标准品以外
只有一个试剂
例如
临床上
常用的
尿素酶法
测定
血浆尿素
它需要
尿素酶
谷氨酸脱氢酶
α-酮戊二酸
NADH
缓冲液等试剂
才能完成反应
但是在用于自动生化分析仪
检测的试剂盒中
一般
将其组合成一个试剂
检测时
只需将
此试剂与血浆混合
即可进行测定
简单
快速
但是单一试剂有一个重要的缺陷
它的抗干扰能力较差
我们知道
临床样本
如血液尿液等
成分非常复杂
其中有些成分也会参与反应
对检测结果形成干扰
那么我们能否通过试剂的优化组合
形成双试剂
而减少一些干扰呢
下面
还以尿素测定为例
来进行说明
尿素的检测
常用
尿素酶-谷氨酸脱氢酶法
其检测原理是
标本中的尿素
在尿素酶催化下
将尿素分解成铵离子(NH4+)和
碳酸根
铵离子在
α-酮戊二酸
和还原性辅酶Ⅰ存在下
经谷氨酸
脱氢酶(GLDH)的催化
生成谷氨酸
同时NADH
被氧化成
NAD+
可在340nm
监测
NADH减少的速率
计算 样品中尿素的含量
在两个反应中
第一个反应特性高
尿素酶
仅仅对尿素有催化作用
但在第二个反应中
存在许多干扰
如血清或尿液中含有铵离子
试剂中也可能含有铵离子
也会消耗
NADH
导致结果偏高
另外血清中的丙酮酸
在乳酸脱氢酶的作用下
消耗
NADH
也会导致检测结果偏高
那么如何通过设计双试剂
来减少
铵离子和丙酮酸
所造成的干扰呢
我们可以在
第一个试剂中
包括α-酮戊二酸
NADH
谷氨酸脱氢酶缓冲液等组分
但是没有尿素酶
第二个试剂中主要是尿素酶
在实验操作时
我们可以将待测样品
加入第一个试剂中
在37℃作用5分钟
再加入第二个试剂
这样通过第一个反应
可以将样品中的干扰物质铵离子
和丙酮酸消耗掉
这样第二个反应中NADH
在340nm的吸光度下降
仅仅反映样本中
尿素的含量
最终实现了通过双试剂的方法
消除铵离子
和丙酮酸所造成的干扰
目前双试剂在临床生化检验中应用
越来越广泛
绝大部分生化检验项目
均实行双试剂
如表所示
列出了部分
生化检验项目试剂盒的剂型
由表可知
部分检验项目
既有单一试剂的试剂盒
也有由
双试剂组成的试剂盒
也有部分项目仅仅有
双试剂组成的试剂盒
最后与大家讨论几个注意事项
第一
双试剂的优点
除了刚才
刚刚介绍的
减少干扰外
它还能提高试剂的稳定性
也就是说
如果检测反应中有两个试剂在一起
会导致其稳定性下降
不利于试剂盒的保存
也可以采用
双试剂的设计思路
第二
根据需要
也有试剂盒采用三试剂
或者多试剂
只是目前双试剂在临床应用最广
应用时
尽量选择双试剂组成的试剂盒
这样可以减少干扰
提高检测的准确性
第三
双试剂的设计原则
这些
双试剂组成的试剂盒中
第一试剂和第二个试剂如何
组合最优化
需要
根据反应原理
及可能的干扰物
进行合理的设计
当然设计好的双试剂还需要通过
试验验证
是否能真正减少干扰
同学们在课后也可以根据以上原则
通过查阅资料
设计
葡萄糖氧化酶法
测定血浆葡萄糖
酶法
检测甘油三酯
免疫比浊法
检测C-反应蛋白的双试剂组成
本次课就到这里
谢谢大家
-1.1 绪论
--1.1 绪论
--1.1 绪论
-第一章知识点测试
-2.1 检验方法的评价
-2.2 临床生化检验分析质量指标
-第二章知识点测试
-3.1 参考区间
--3.1 参考区间
--3.1 参考区间
-3.2 医学决定水平
-3.3 诊断性能评价
-第三章知识点测试
-第一周测试
-4.1 酶活性测定有哪些方法?
-4.2 酶偶联法测定酶活性
-4.3 酶循环法
--4.3 酶循环法
--4.3 酶循环法
-4.4 酶活性单位
-4.5 同工酶
--4.5 同工酶
--4.5 同工酶
-4.6 如何上机设定测定酶活性的K值?
-第四章随堂测试
-5.1 自动生化分析仪
-5.2 后分光技术
-5.3 试剂盒双试剂
-5.4 自动生化分析仪的基本结构
-第五章知识点测试
-第二周测试
-6.1 血清总蛋白的检测
-6.2 血清蛋白质电泳
-6.3 急性时相反应蛋白
-6.4 C-反应蛋白与超敏C-反应蛋白
-6.5 高尿酸血症与痛风
-第六章随堂测试
-7.1 血糖及影响因素
-7.2 葡萄糖的检测
-7.3 口服葡萄糖耐量试验
-7.4 HbA1c的检测
-7.5 糖尿病自身抗体的检测
-7.6 尿白蛋白的检测
-7.7 糖尿病的实验诊断
-第七章知识点测试
-第三周测试
-8.1 血脂
--8.1 血脂
--8.1 血脂
-8.2 血浆脂蛋白
--8.2血浆脂蛋白
-8.3 载脂蛋白
--8.3 载脂蛋白
--8.3 载脂蛋白
-8.4 原发性高脂蛋白血症的临床检测
-第八章随堂测试
-第四周测试
-10.1 微量元素的检测
-10.2维生素的测定
-第十章知识点测试
-11.1 疾病时血清酶活力改变的机制
-11.2 常用血清酶在部分疾病时的改变
-第十一章随堂测试
-第五周测试
-12.1 转氨酶与肝实质细胞损伤
-12.2 肝纤维化的生物化学检测概况
-12.3 肝纤维化的生物化学检测指标
-12.4 黄疸发生的生物化学机制
-12.5 黄疸发生的生物化学鉴别诊断
-第十二章随堂测试
-13.1 肾脏疾病生物化学检验项目的选择与应用
-13.2 肾脏疾病的病例讨论
-第六周测试
-14.1 心肌损伤的生化标志物与应用
-14.2 心衰的生化标志物与应用
-第十四章随堂测试
-15.1 钙磷镁代谢异常及其检测
-15.2 骨代谢激素调节、异常及其检测
-15.3 成骨标志物及其检测
-第十五章随堂测试
-第七周测试
-16.1 下丘脑-垂体功能检查
-16.2 甲状腺功能检测
-16.3 肾上腺髓质功能检测
-16.4 肾上腺皮质功能检测
-第十六章随堂测试
-17.1 胰腺炎的生物化学检测
-第八周测试
-18.1 部分神经系统疾病的临床分子病理及实验室检测
-18.2 阿尔茨海默病的分子病理与实验检测
-18.3 脑脊液的生化检测
-第十八章随堂测试
-19.1 妊娠相关疾病诊断指标
-19.2唐氏综合征的产前筛查与产前诊断
-第九周测试
-20.1 治疗性药物监测
-第二十章知识点测试
-21.1 临床毒物检测
-21.2 铅中毒的检测
-21.3 酒驾的检测
-第十周测试
-第二十一章知识点测试
-期末考试