常用体内生物样品的制备与贮存在线视频

大家好！

今天我们一起学习

常用体内生物样本的制备与贮存

所有可能含有药物及其

代谢物的生物样本都是

体内药物分析的研究对象

包括体液 组织器官 排泄物

体液如血液 唾液 脑脊液 胃液

胆汁 乳汁 精液 泪液

组织器官

如胃 肠 肝 肾 肺

脑 肌肉 头发等

排泄物如尿液 粪便 汗液

其中血液 唾液 脑脊液等

这个液体样品为均匀性生物样本

组织 毛发 粪便等为

非均匀性生物样本

血液中的药物浓度可间接预测

药物在作用部位的药效和毒性

因此体内药物分析最常用的

生物样本是血液

包括全血

血浆或血清

血样如何采集呢 受试者为人时

通常从肘静脉采集

所需血样量少时可从毛细管采集

减少受试者的痛苦

不同受试动物的血样采集方法不同

如大鼠的眼眶取血

兔子的耳缘取血

狗的静脉取血等

采集动物血液时

要注意采血量应不影响其正常生理功能

以免破坏机体对药物的正常反应

动物采血量不宜超过

动物总血量的十分之一

血液由血浆和悬浮于其中的血细胞组成

将采集的血液置于含有抗凝剂的试管中

但不经离心操作

保持血浆和血细胞混合在一起

为全血

将采集的静脉或动脉血液置

含有抗凝剂的离心管中

混合后

离心使血浆与血细胞分离

所得淡黄色上清液为血浆

将采集的静脉或动脉血液置离心管中

于37℃或室温放置至少0.5~1 h

待血液凝固后

用细竹棒或玻璃棒轻轻剥去

凝固在试管壁上的血饼

离心

上层澄清的淡黄色液体即为血清

抗凝剂有肝素 EDTA 枸橼酸盐

氟化钠 草酸等

由于肝素是体内正常生理成分

不会改变血样的化学组成

或引起药物的变化

一般不会干扰药物的测定

是最常用的抗凝剂

那么三种血液样品之间有什么相同点

和不同点呢 我们来看一下

全血因含有血细胞

干扰最大

需要经复杂的预处理才可以进行测定

因此仅用于药物在血浆和红血球中的

分配比不是一个常数

或血浆药物浓度波动大 含量低等时候

血浆和血清仅差一个纤维蛋白原

其他基本一样

血浆因制取量较多和制备速度快

是最常用的血液样本

而当抗凝剂对药物有影响时

就只能选择血清

血样采集后

应及时分离血浆或血清

一般最迟不超过2 h

采集后的血样

置于微量离心管或硬质玻璃试管中

完全密塞后

冰箱或冷冻柜中保存

若不及时分离

则冰冻后易引起细胞破裂

从而阻碍血浆或血清的分离

同时也会影响血浆或血清中

药物的测定结果

所以一定要及时分离

血液样品短期保存时

一般置4℃冰箱冷藏

长期保存时

须置冷冻柜（-20℃~-80℃）中

冷冻保存

长期保存时

一般采用小体积分装

减少多次冻融对药物稳定性的影响

一般认为

当药物在体内达到稳态时

血浆或血清中的药物浓度能够

反应药物在体内（靶器官）的状况

因而血浆或血清中药物浓度

可作为体内药物浓度的可靠指标

因此血浆和血清是最常用的生物样本

在药代动力学研究 生物利用度测定

临床治疗药物监测 滥用药物检测

体内内源性物质测定等方面

均有广泛的应用

尿样也是体内药物分析中

最常用的样品之一

大多采用自然排尿方式收集

特殊情况才会用尿管插管

根据收集时间分为

随时尿 晨尿 白天尿

夜间尿及时间尿

其中时间尿在体内药物分析中应用最多

通常收集服药后一定时间内

如 8 12 24 h尿液

测定尿中药物总量

即一定时间内累积量

尿样收集时必须记录排出的尿液体积

根据测得的尿药浓度

求算药物的累积量

尿样主要成分是水 尿素及盐类

易滋生细菌

不易保存

若在室温保存

应在采样后立即加入防腐剂

若短时间内即可进行分析

可置冰箱 4℃冷藏保存

若需放置较长时间

则应冷冻贮存

常用的防腐剂有

甲苯 二甲苯

三氯甲烷以及醋酸 浓盐酸等

药物在体内的清除主要通过尿液排泄

尿中含有原型药物和各种代谢物

尿药浓度测定主要用于药物剂量回收

药物肾清除率 药物代谢研究

药酶多态性研究 兴奋剂检测等

头发样品取样方便

无伤害 受试者顺应性好

样品中分析物状态稳定

可以再次获得

也是常用的生物样品之一

但不同药物在头发里分布不均匀

如

微量元素在前额部位的头发中含量最低

枕部含量最高

头发中微量元素测定

国内一般选取脑后枕部取样

滥用药物检测、司法鉴定时

国外头发试验协会推荐选取头的后顶部

因为在后顶部当中滥用药物存在量较大

国外头发试验协会就是推荐选取后顶部

进行滥用药物的检测和司法鉴定

采集后的头发按同一方向

用铝箔（保鲜膜）包裹

水平密封在干净 干燥的纸袋或容器中

置室温、暗处保存

头发样品不宜贮存在冰箱或冰冻保存

因其冷冻膨胀会造成药物损失

采集后的头发样品需经过

切割 洗涤 干燥后

进行粉碎均匀化等处理

这些处理的目的

一是除去外源性杂质的干扰

二是提高药物的提取效率

头发样品主要用于体内微量元素的

含量测定 用药史的估计 滥用药物

和兴奋剂检测及法医毒药分析

头发样品在药物滥用中的主要优势

在可以获得尿液分析所不能获得的

长期用药史信息

并可以和临床合理用药相区分

药物在脏器组织中的分布情况

以及临床上中毒死亡原因的

查找需用到组织样品

组织样品的采集与贮存步骤为

处死动物

快速切下所需组织

洗去血和污染物

吸干水分

把组织剪碎

进行匀浆后冷冻保存

组织样品在新药临床前

药代动力学研究中

可了解到药物在组织中的

分布和积蓄情况

在临床上可分析中毒原因

进行司法鉴定等

将药物保持在采样时刻的稳定状态直到

分析是体内药物分析结果

价值体现的一个关键

不同样品不同药物的处理方法各有不同

可采用的方法

一 调节pH

二 加入防腐剂

比如尿液

三 冷冻分装保存

比如放到冰箱冷冻保存

这样可以降低变化速度

四 加入抗氧剂

如肾上腺素

这一类易被氧化的药物要加入抗氧剂

可以减缓血样在储存过程当中的药物

被氧化的程度

五 去活性

什么是去活性呢 我们知道

生物样品中常含有一些

具有生物活性的酶

采样后可能对药物还有作用

需要立即终止其活性

即去活性

常用方法包括使酶蛋白变性失活

如液氮速冻

微波照射

匀浆/沉淀

煮沸等

或加入酶活性阻断剂

如氟化钠、三氯醋酸等

我们举个例子

普鲁卡因

普鲁卡因当中含有一个酯键

血浆当中的普鲁卡因会受到酯酶的作用

会发生水解

因此普鲁卡因采集后需加入

适量酶抑制剂抑制酯酶的活性

保证血样中普鲁卡因的稳定性

最后用思维导图对本节内容进行小结

希望大家课后及时复习

今天的课就上到这里

下节课见

谢谢大家！