当前课程知识点:药物分析 > 第五章 药物的含量测定 > 5.9 高效液相色谱法(二) > 高效液相色谱法(二)
大家好
今天我们继续学习高效液相色谱法
在紫外可见分光光度法中
我们知道 在测定前一定要做仪器校正
那么高效液相色谱
就要做系统适用性试验
色谱系统的适用性试验
通常包括理论板数、分离度
灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数
按各品种正文项下要求对
色谱系统进行适用性试验
色谱系统适用性试验
即用规定的对照品溶液或系统适用性
试验溶液在规定的色谱系统进行试验
应符合要求
必要时
可对色谱系统进行适当调整
色谱柱的理论板数(n)
用于评价色谱柱的分离效能
由于不同物质在
同一色谱柱上的色谱行为不同
采用理论板数作为衡量柱效能的指标时
应指明测定物质
一般为待测组分或内标物质的理论板数
一般为待测组分或内标物质的理论板数
色谱柱的理论板数按下式计算
色谱柱理论板数越高
说明对该物质分离效能越好
分离度(R)
用于评价待测物质与
被分离物质之间的分离程度
是衡量色谱系统分离效能的关键指标
分离度按下式计算
除另有规定外
待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的
分离度应不小于1.5
灵敏度
用于评价色谱系统检测微量物质的能力
通常以信噪比(S/N)来表示
建立方法时
可通过测定一系列不同浓度的
供试品或对照品溶液来测定信噪比
定量测定时
信噪比应不小于10
定性测定时
信噪比应不小于3
系统适用性试验中可以设置
灵敏度实验溶液来
评价色谱系统的检测能力
拖尾因子(T)
用于评价色谱峰的对称性
按下式进行计算
以峰高作定量参数时
除另有规定外
T值应在0.95~1.05之间
以峰面积作定量参数时
一般的峰拖尾或前伸
不会影响峰面积积分
但严重拖尾会影响基线和色谱峰
起止的判断和峰面积积分的准确性
此时应在品种正文项下
对拖尾因子作出规定
重复性
用于评价色谱系统连续进样时
响应值的重复性能
除另有规定外
通常取各品种项下的对照品溶液
连续进样5次
其峰面积测量值
或内标比值或其校正因子的
相对标准偏差应不大于2.0%
这个试验反映了仪器工作性能的稳定性
或称为色谱工作系统的精密度
它是每次开机后首先要做的日常工作
为仪器的精密度
不是分析方法学研究中的精密度试验
高效液相的定量方法有两种
内标法和外标法
内标法
精密称(量)取对照品和内标物质
分别配成溶液
各精密量取适量
混合配成校正因子测定用的对照溶液
取一定量进样
记录色谱图
测量对照品和内标物质的峰面积或峰高
按下式计算校正因子
再取各品种项下含有
内标物质的供试品溶液
进样 记录色谱图
测量供试品中待测成分
和内标物质的峰面积或峰高
按下式计算含量
采用内标法
可避免因样品前处理
及进样体积误差对测定结果的影响
外标法
精密称(量)取对照品和供试品
配制成溶液
分别精密取一定量
进样
记录色谱图
测量对照品溶液和供试品溶液中
待测成分的峰面积(或峰高)
按下式计算含量
由于微量注射器不易精确控制进样量
当采用外标法测定时
以手动进样器定量环
或自动进样器进样为宜
原料药百分含量的计算公式如下
最后我们用思维导图
对高效液相色谱法进行小结
希望大家课后及时复习
今天的课就上到这里
谢谢大家!
-1.1 药物分析的性质与任务
-第一章单元测试
-2.1 中国药典(一)
--中国药典(一)
-2.2 中国药典(二)
--中国药典(二)
-2.3 中国药典(三)
--中国药典(三)
-2.4 国际药品标准
--国际药品标准
-2.5 药品检验与监督
--药品检验与监督
-2.6 药品检验工作的基本程序
-2.7 药品管理规范
--药品管理规范
-第二章单元测试
-3.1 物理常数测定法-熔点
-3.2 物理常数测定法-吸收系数
-3.3 物理常数测定法-比旋度
-3.4 化学鉴别法
--化学鉴别法
-3.5 光谱鉴别法
--光谱鉴别法
-3.6 色谱鉴别法
--色谱鉴别法
-第三章单元测试
-4.1 药物中杂质的来源及分类
-4.2 杂质的限量要求与计算
-4.3 一般杂质的检查(一)
-4.4 一般杂质的检查(二)
-4.5 一般杂质的检查(三)
-4.6 一般杂质的检查(四)
-4.7 特殊杂质的检查(一)
-4.8 特殊杂质的检查(二)
-第四章单元测试
-5.1 容量分析法-酸碱滴定法
--容量分析法-概述
-5.2 容量分析法-酸碱滴定法
-5.3 容量分析法-氧化还原滴定法
-5.4 容量分析法-非水溶液滴定法
-5.5 紫外-可见分光光度法——概述
-5.6 紫外-可见分光光度法——比色法
-5.7 紫外-可见分光光度法——计算分光光度法
-5.8 高效液相色谱法(一)
-5.9 高效液相色谱法(二)
-5.10 气相色谱法
-5.11 样品的前处理方法(一)
-5.12 样品的前处理方法(二)
-5.13 药品分析方法的验证(一)
-5.14 药品分析方法的验证(二)
-第五章单元测试
-6.1 苯巴比妥及其制剂的分析
-6.2 司可巴比妥钠及其制剂的分析
-6.3 阿司匹林及其制剂的分析
-6.4 盐酸普鲁卡因及其制剂的分析
-6.5 磺胺甲噁唑及其制剂的分析
-6.6 左氧氟沙星及其制剂的分析
-6.7 异烟肼及其制剂的分析
-6.8 硝苯地平及其制剂的分析
-6.9 盐酸氯丙嗪及其制剂的分析
-6.10 盐酸麻黄碱及其制剂的分析
-6.11 硫酸阿托品及其制剂的分析
-6.12 硫酸奎宁及其制剂的分析
-6.13 地塞米松磷酸钠及其制剂的分析
-6.14 黄体酮及其制剂的分析
-6.15 维生素 B1 及其制剂的分析
-6.16 维生素 C 及其制剂的分析
-6.17 青蒿素及其制剂的分析
-6.18 青霉素钠及其制剂的分析
-6.19 头孢丙烯及其制剂的分析
-6.20 硫酸链霉素及其制剂的分析
-6.21 硫酸庆大霉素及其制剂的分析
-6.22 盐酸四环素及其制剂的分析
-第六章单元测试
-7.1 代表性辅料分析(一)
-7.2 代表性辅料分析(二)
-第七章单元测试
-8.1 制剂分析及其特点
--制剂分析及其特点
-8.2 片剂分析
--片剂分析
-8.3 注射剂分析
--注射剂分析
-8.4 复方制剂分析
--复方制剂分析
-第八章单元测试
-9.1 中药分析及其特点
--中药分析及其特点
-9.2 中药分析中样品处理方法
-9.3 中药的鉴别(一)
--中药的鉴别(一)
-9.4 中药的鉴别(二)
--中药的鉴别(二)
-9.5 中药指纹图谱与特征图谱
-9.6 中药的检查(一)
--中药的检查(一)
-9.7 中药的检查(二)
--中药的检查(二)
-9.8 中药的含量测定(一)
-9.9 中药的含量测定(二)
-第九章单元测试
-10.1 生物药物分析的特点
-10.2 生化药物分析
--生化药物分析
-10.3 生物制品分析
--生物制品分析
-第十章单元测试
-11.1 体内药物分析概述
--体内药物分析概述
-11.2 常用体内生物样品的制备与贮存
-11.3 体内生物样品分析的前处理(一)
-11.4 体内生物样品分析的前处理(二)
-11.5 体内分析方法的建立
-11.6 体内药物分析方法的建立与验证(一)
-11.7 体内药物分析方法的建立与验证(二)
-11.8 体内药物分析方法的建立与验证(三)
-第十一章单元测试