当前课程知识点：药物分析 > 第十一章 体内药物分析 > 11.8 体内药物分析方法的建立与验证（三） > 体内药物分析方法的建立与验证（三）
大家好
今天我们继续通过实例
学习体内样品分析方法验证
准确度和精密度
是方法验证的重要指标
准确度用相对回收率RR
或相对误差RE表示
精密度用
相对标准差（变异系数）RSD表示
验证批内准确度和批内精密度
至少需要一个分析批的4个浓度
即定量下限以及低
中
高浓度的样品
每个浓度至少5个样品
高浓度要接近定量上限
约为定量上限的75%
低浓度在定量下限的三倍内
中浓度为标准曲线的中间浓度
照拟定方法测定
测定的同时应做随行标准曲线
并用随行标准曲线的回归方程
计算QC样品的浓度
准确度均值一般应在
质控样品标示值的±15%之内
定量下限准确度应在
标示值的±20%范围内
即 RD≤20%
精密度要求批内RSD
一般不得超过15%
定量下限的批内RSD
不得超过20%
验证批间准确度和批间精密度
通过至少3个分析批
在至少两天内进行
每批均用定量下限以及低
中
高浓度质控样品4个浓度
每个浓度至少5 个测定值来评价
准确度均值一般应在
质控样品标示值的±15%范围内
对于定量下限
应在标示值的±20%范围内
精密度要求批间RSD
一般不得超过15%
定量下 限的批间RSD
不得超过20%
案例中在2天做了3个分析批
一个分析批4个浓度
每个浓度6份样品
每个分析批的浓度
均用随行标准曲线计算
结果表明该方法的准确度
和精密度均符合要求
测定实际试验样品时
经常会出现浓度高于定量上限的情况
如果重新进行方法学评价
会大大增加时间
精力
财力等成本
稀释可靠性就是来
评价样品稀释一定倍数后
其结果的准确度和精密度
会不会受到影响
具体做法是
先评估样品需要稀释的倍数
然后配制浓度高于定量上限的
QC样品
（经稀释后的浓度
应在标准曲线的定量范围内）
每个稀释因子平行稀释5份
照拟定方法测定
用随行标准曲线计算
同一稀释因子的
RE应在±15%之内
RSD不超过15%
本案例中
标准曲线的定量范围
在0.5~100 ng/mL
如要了解稀释5倍的可靠性
配制400 ng/mL的QC样品
用空白基质平行稀释成
5份80 ng/mL的QC样品
用拟定方法进行测定
取5个结果计算准确度RE
和精密度RSD
均符合要求
说明稀释5倍后样品
测定的准确度和精密度不受影响
当采用质谱方法时
应该考察基质效应
取至少6批来自
不同供体的空白基质
照拟定预处理方法进行提取后
分别加入高
低浓度的待测物工作溶液和
内标工作溶液
进样
计算有基质存在下的
待测物和内标的峰面积（B）
另取同样量的高
低浓度的待测物工作溶液
和内标工作溶液
加入与空白基质提取物
相同体积的空白溶剂
进样
得不含基质的待测物
和内标纯溶液的峰面积（A）
用B/A分别计算待测物
和内标的基质因子
进一步将待测物的基质因子
除以内标的基质因子
得经内标归一化的基质因子
从 6 批基质计算的内标归一化的
基质因子的变异系数不得大于15%
本案例中
6个不同个体的空白基质
分别进行评价
结果表明高低浓度下
6个经内标归一化的基质因子
均大于90%
且变异系数均小于15%
表明基质效应可忽略不计
稳定性试验主要取高
低两个浓度的QC样品分别在
预处理后及相应条件下储存后
马上分析
用新鲜制备的标准曲线计算浓度
测得浓度与标示浓度相比较
每一浓度的均值
与标示浓度的偏差
在±15% 范围内即可判定为稳定
通常应进行下列稳定性考察：
第一 分析物和内标物标准储备液
和工作溶液放置稳定性
第二 从冰箱储存条件到室温
或样品处理温度
基质中分析物的冷冻和融化稳定性
第三 基质中分析物在冰箱储存的
长期稳定性
第四 处理过的样品在室温下或
在试验过程储存条件下的稳定性
第五 处理过的样品
在自动进样器温度下的稳定性
本案例考察了待测物和
内标出储备液即工作溶液的稳定性
确定了其稳定的时间范围
本案例考察了苏特替尼低
高两个浓度血浆样品在室温放置
2 6 19个小时
湿冰放置 5 h
经乙腈蛋白沉淀处理后室温
4℃ 放置 23 h以及经历 -70℃ 下
六次冷冻-冰水浴解冻循环的稳定性
结果表明：
1. 血浆样品室温放置 6
19 h 苏特替尼不稳定
浓度分别降低约 29% 和 66%
究其原因是
苏特替尼为不可逆 EGFR-TKIs
（表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂）
分子结构中含有
丙烯酰胺（Michael受体）
推测苏特替尼可能
与血浆蛋白共价结合
研究结果表明
苏特替尼血浆样品
在室温放置 2 h 内与 HSA（人血清白蛋白）
的共价结合不影响测定结果的准确性
但随温度的上升
时间的延长苏特替尼易于
与人血浆中的 HSA
形成共价结合物
使血浆浓度降低
因此血浆样品室温放置不可超过2h
血浆样品可湿冰放置5h
血浆样品预处理后室温放置
和4℃放置23h均可
-70℃六次冷冻-冰水解冻循环
对稳定性无影响
以上是体内分析方法验证的内容
验证时各种指标的验证顺序
可根据实际情况进行调整
最后用思维导图对本节内容进行小结
希望大家课后及时复习
今天的课就上到这里
谢谢大家
定量下限
标准曲线
残留及精密度
准确度考察
最后用思维导图对本节内容进行小结
希望大家课后及时复习
今天的课就上到这里
谢谢大家
-1.1 药物分析的性质与任务
-第一章单元测试
-2.1 中国药典（一）
--中国药典（一）
-2.2 中国药典（二）
--中国药典（二）
-2.3 中国药典（三）
--中国药典（三）
-2.4 国际药品标准
--国际药品标准
-2.5 药品检验与监督
--药品检验与监督
-2.6 药品检验工作的基本程序
-2.7 药品管理规范
--药品管理规范
-第二章单元测试
-3.1 物理常数测定法-熔点
-3.2 物理常数测定法-吸收系数
-3.3 物理常数测定法-比旋度
-3.4 化学鉴别法
--化学鉴别法
-3.5 光谱鉴别法
--光谱鉴别法
-3.6 色谱鉴别法
--色谱鉴别法
-第三章单元测试
-4.1 药物中杂质的来源及分类
-4.2 杂质的限量要求与计算
-4.3 一般杂质的检查（一）
-4.4 一般杂质的检查（二）
-4.5 一般杂质的检查（三）
-4.6 一般杂质的检查（四）
-4.7 特殊杂质的检查（一）
-4.8 特殊杂质的检查（二）
-第四章单元测试
-5.1 容量分析法-酸碱滴定法
--容量分析法-概述
-5.2 容量分析法-酸碱滴定法
-5.3 容量分析法-氧化还原滴定法
-5.4 容量分析法-非水溶液滴定法
-5.5 紫外-可见分光光度法——概述
-5.6 紫外-可见分光光度法——比色法
-5.7 紫外-可见分光光度法——计算分光光度法
-5.8 高效液相色谱法（一）
-5.9 高效液相色谱法（二）
-5.10 气相色谱法
-5.11 样品的前处理方法（一）
-5.12 样品的前处理方法（二）
-5.13 药品分析方法的验证（一）
-5.14 药品分析方法的验证（二）
-第五章单元测试
-6.1 苯巴比妥及其制剂的分析
-6.2 司可巴比妥钠及其制剂的分析
-6.3 阿司匹林及其制剂的分析
-6.4 盐酸普鲁卡因及其制剂的分析
-6.5 磺胺甲噁唑及其制剂的分析
-6.6 左氧氟沙星及其制剂的分析
-6.7 异烟肼及其制剂的分析
-6.8 硝苯地平及其制剂的分析
-6.9 盐酸氯丙嗪及其制剂的分析
-6.10 盐酸麻黄碱及其制剂的分析
-6.11 硫酸阿托品及其制剂的分析
-6.12 硫酸奎宁及其制剂的分析
-6.13 地塞米松磷酸钠及其制剂的分析
-6.14 黄体酮及其制剂的分析
-6.15 维生素 B1 及其制剂的分析
-6.16 维生素 C 及其制剂的分析
-6.17 青蒿素及其制剂的分析
-6.18 青霉素钠及其制剂的分析
-6.19 头孢丙烯及其制剂的分析
-6.20 硫酸链霉素及其制剂的分析
-6.21 硫酸庆大霉素及其制剂的分析
-6.22 盐酸四环素及其制剂的分析
-第六章单元测试
-7.1 代表性辅料分析（一）
-7.2 代表性辅料分析（二）
-第七章单元测试
-8.1 制剂分析及其特点
--制剂分析及其特点
-8.2 片剂分析
--片剂分析
-8.3 注射剂分析
--注射剂分析
-8.4 复方制剂分析
--复方制剂分析
-第八章单元测试
-9.1 中药分析及其特点
--中药分析及其特点
-9.2 中药分析中样品处理方法
-9.3 中药的鉴别（一）
--中药的鉴别（一）
-9.4 中药的鉴别（二）
--中药的鉴别（二）
-9.5 中药指纹图谱与特征图谱
-9.6 中药的检查（一）
--中药的检查（一）
-9.7 中药的检查（二）
--中药的检查（二）
-9.8 中药的含量测定（一）
-9.9 中药的含量测定（二）
-第九章单元测试
-10.1 生物药物分析的特点
-10.2 生化药物分析
--生化药物分析
-10.3 生物制品分析
--生物制品分析
-第十章单元测试
-11.1 体内药物分析概述
--体内药物分析概述
-11.2 常用体内生物样品的制备与贮存
-11.3 体内生物样品分析的前处理（一）
-11.4 体内生物样品分析的前处理（二）
-11.5 体内分析方法的建立
-11.6 体内药物分析方法的建立与验证（一）
-11.7 体内药物分析方法的建立与验证（二）
-11.8 体内药物分析方法的建立与验证（三）
-第十一章单元测试
