当前课程知识点：药物分析 > 第十一章 体内药物分析 > 11.5 体内分析方法的建立 > 体内分析方法的建立
大家好！
今天我们一起学习
体内样品分析方法的建立
选择性好 灵敏度高 稳定可靠的
分析技术是实现
体内药物分析的前提条件
色谱法及联用技术因其能
实现对复杂生物样品中
微量成分的定性定量
在体内药物分析中应用广泛
大多数小分子药物的体内检测和
研究会选择液相色谱-质谱联用技术
大分子类药物或内源性物质的
检测与分析也可以选择
色谱法及联用技术
免疫分析法主要用于蛋白质
多肽等生物大分子的监测和药动学研究
因交叉反应的存在
免疫分析不太适于小分子药物
及其代谢的研究
生物分析法的结果可以直接反映药效
在抗生素类药物的生物利用度
生物等效性或临床TDM上有应用
但其选择性较差
需采用选择性高的方法
如色谱分析法进行平行监测
还有一些特殊的技术可以在
某些领域提供特殊有效的数据
如电化学传感技术可以实现对
体内神经因子的在线微渗透检测分析
质谱成像技术可以提供目标化合物的
空间分布信息
放射性核素标记法可以追踪药物
在体内的吸收 分布
代谢和排泄的具体过程
提供全面的数据
总之
色谱-质谱联用技术是生物样本中
药物及其代谢产物分析检测的首选方法
好的分析方法是实验成功的必要条件
如何建立一个好的体内药物分析方法呢
第一要明确分析测定的目的和要求
药物测定的目的不同
分析方法的选用也不同
例如
药物代谢动力学研究中常常需
同时测定原形药物和代谢产物
要求使药物及其代谢物
从结合物或缀合物中释放出来
并加以分离后测定
这对样品制备的要求就应全面考虑
并要求方法具有较宽的线性范围
较高的灵敏度（10-9 g/ml以下）
和准确度
以及较高的分离能力
原形药物及其代谢产物的分离
因此
在该类分析的方法选择上
不必强调方法的简便、快速
而要考虑的是整个测定范围内
样品浓度变化较大这一因素
大多采用色谱及其联用技术
如HPLC、LC-MS等
临床TDM中
药物浓度通常为有效治疗浓度范围
所以在分析方法上尽量简便、易行
以适用于长期、批量样品的测定
如RIA或EIA等
在中毒患者的临床抢救中
通常药物浓度极高
这对样品制备的要求可放宽些
应特别强调方法的特异性和分析速度
而不必强调方法的灵敏度
目的明确后
应系统检索国内外的科技文献
对药物的理化性质
在生物体内的存在状况
药代动力学参数 分析检测方法等
相关资料进行分析和研究
要充分了解待测药物的特性与理化状况
因为生物样品的类型不同
药物的结构 理化性质及药理性质
存在形式 浓度范围预处理方法也不同
如血浆或血清样品常需去除蛋白
使药物从蛋白结合物中释放出来
尿液样品常采用酸或酶水解
使药物从缀合物中释放出来
头发样品需进行有机破坏
使微量元素释放出来
对于尚无文献报道的药物
可参考同类药物的相关文献
从文献资料上获得的分析方法可能很多
且各有优缺点
应在文献查阅和整理的基础上
根据药物的理化性质 存在状况
分析测定的目的与要求
同时更应结合本实验室的条件
选择合适的分析方法
下图大致反映了检测方法
与样品预处理要求的相互关系
分析方法建立的一般程序为
第一步明确测定的目的与要求
查阅文献资料
了解待测药物的理化特性与体内状况
结合实验室条件确定方法后
初步拟定分析方法
第二步通过对各种分析条件的优化
筛选出最佳的分析条件
建立分析方法
第三部对分析方法进行验证
以确认方法可行性
第四部对实际样品进行测定
下面以HPLC法为例简单
说明分析方法的建立过程
第一步被测物纯品试验
以结构决定性质
性质决定分析方法为主线
以待测药物的理化性质为基础
参考文献资料拟定初步的色谱条件
取待测药物或其特定的活性代谢产物
内标的对照标准物质配制成
一定浓度的纯溶液
照拟定的分析方法进行测定
确定最佳色谱条件
灵敏度与线性范围等
对于需经化学衍生化预处理的药物
需进行试剂与溶剂试验
来优化衍生化条件
通过空白生物基质试验
进行前处理方法及色谱条件的优化
方法为
取空白生物基质
采用拟定的分析方法预处理
并测定响应信号
本试验主要考察生物基质中内源性
物质对待测定组分的干扰（方法选择性）
在待测药物 代谢物
内标物质等的“信号窗”
信号附近的有限范围内
不应出现内源性物质信号
要配制空白生物基质 空白生物基质+内标
空白生物基质+对照标准物质+内标
给药后实际样品4个样品进行试验
验证方法的选择性
方法的选择性符合要求后
需要配制质控样品和校正标样等
模拟生物样品进行方法学验证
包括建立标准曲线
验证其精密度 准确度
确定定量下限 提取回收率
了解稳定性 残留等
最后进行实际样品测定
试验过程中为保证实验结果的可靠性
需进行质量控制
下面通过示例进一步
了解体内样品分析方法建立的过程
测定目的
伊伐布雷定及其活性代谢物
在大鼠血浆中的药动学研究
从这个目的可见有5个关键词
伊伐布雷定 活性代谢物
大鼠 血浆 药动学
文献检索
了解待测物的结构特点
光学性质（有荧光）
溶解性质
两个待测物均易溶于水
不适于采用LLE
沉淀蛋白法又难以达到检测灵敏度等
结合实验室条件确定选用
固相萃取进行样品前处理
采用HPLC法测定
荧光检测器检测
测定大鼠血浆中伊伐布雷定
及其活性代谢物的浓度
拟定初步分析方法后
采用纯品对色谱条件进行优化
这里需要重点考察的是流动相
筛选内标物
空白生物基质试验进行
固相萃取条件的优化
并验证选择性
通过预实验确定标准曲线的范围
采用质控样品和校正标样
进行方法学验证
给大鼠喂药后采集血浆进行样品测定
同时进行质量监控
保证数据的可靠性
最后进行数据处理
形成完整的报告
最后用思维导图对本节内容进行小结
希望大家课后及时复习
今天的课就上到这里
下节课见
谢谢大家！
-1.1 药物分析的性质与任务
-第一章单元测试
-2.1 中国药典（一）
--中国药典（一）
-2.2 中国药典（二）
--中国药典（二）
-2.3 中国药典（三）
--中国药典（三）
-2.4 国际药品标准
--国际药品标准
-2.5 药品检验与监督
--药品检验与监督
-2.6 药品检验工作的基本程序
-2.7 药品管理规范
--药品管理规范
-第二章单元测试
-3.1 物理常数测定法-熔点
-3.2 物理常数测定法-吸收系数
-3.3 物理常数测定法-比旋度
-3.4 化学鉴别法
--化学鉴别法
-3.5 光谱鉴别法
--光谱鉴别法
-3.6 色谱鉴别法
--色谱鉴别法
-第三章单元测试
-4.1 药物中杂质的来源及分类
-4.2 杂质的限量要求与计算
-4.3 一般杂质的检查（一）
-4.4 一般杂质的检查（二）
-4.5 一般杂质的检查（三）
-4.6 一般杂质的检查（四）
-4.7 特殊杂质的检查（一）
-4.8 特殊杂质的检查（二）
-第四章单元测试
-5.1 容量分析法-酸碱滴定法
--容量分析法-概述
-5.2 容量分析法-酸碱滴定法
-5.3 容量分析法-氧化还原滴定法
-5.4 容量分析法-非水溶液滴定法
-5.5 紫外-可见分光光度法——概述
-5.6 紫外-可见分光光度法——比色法
-5.7 紫外-可见分光光度法——计算分光光度法
-5.8 高效液相色谱法（一）
-5.9 高效液相色谱法（二）
-5.10 气相色谱法
-5.11 样品的前处理方法（一）
-5.12 样品的前处理方法（二）
-5.13 药品分析方法的验证（一）
-5.14 药品分析方法的验证（二）
-第五章单元测试
-6.1 苯巴比妥及其制剂的分析
-6.2 司可巴比妥钠及其制剂的分析
-6.3 阿司匹林及其制剂的分析
-6.4 盐酸普鲁卡因及其制剂的分析
-6.5 磺胺甲噁唑及其制剂的分析
-6.6 左氧氟沙星及其制剂的分析
-6.7 异烟肼及其制剂的分析
-6.8 硝苯地平及其制剂的分析
-6.9 盐酸氯丙嗪及其制剂的分析
-6.10 盐酸麻黄碱及其制剂的分析
-6.11 硫酸阿托品及其制剂的分析
-6.12 硫酸奎宁及其制剂的分析
-6.13 地塞米松磷酸钠及其制剂的分析
-6.14 黄体酮及其制剂的分析
-6.15 维生素 B1 及其制剂的分析
-6.16 维生素 C 及其制剂的分析
-6.17 青蒿素及其制剂的分析
-6.18 青霉素钠及其制剂的分析
-6.19 头孢丙烯及其制剂的分析
-6.20 硫酸链霉素及其制剂的分析
-6.21 硫酸庆大霉素及其制剂的分析
-6.22 盐酸四环素及其制剂的分析
-第六章单元测试
-7.1 代表性辅料分析（一）
-7.2 代表性辅料分析（二）
-第七章单元测试
-8.1 制剂分析及其特点
--制剂分析及其特点
-8.2 片剂分析
--片剂分析
-8.3 注射剂分析
--注射剂分析
-8.4 复方制剂分析
--复方制剂分析
-第八章单元测试
-9.1 中药分析及其特点
--中药分析及其特点
-9.2 中药分析中样品处理方法
-9.3 中药的鉴别（一）
--中药的鉴别（一）
-9.4 中药的鉴别（二）
--中药的鉴别（二）
-9.5 中药指纹图谱与特征图谱
-9.6 中药的检查（一）
--中药的检查（一）
-9.7 中药的检查（二）
--中药的检查（二）
-9.8 中药的含量测定（一）
-9.9 中药的含量测定（二）
-第九章单元测试
-10.1 生物药物分析的特点
-10.2 生化药物分析
--生化药物分析
-10.3 生物制品分析
--生物制品分析
-第十章单元测试
-11.1 体内药物分析概述
--体内药物分析概述
-11.2 常用体内生物样品的制备与贮存
-11.3 体内生物样品分析的前处理（一）
-11.4 体内生物样品分析的前处理（二）
-11.5 体内分析方法的建立
-11.6 体内药物分析方法的建立与验证（一）
-11.7 体内药物分析方法的建立与验证（二）
-11.8 体内药物分析方法的建立与验证（三）
-第十一章单元测试
