当前课程知识点：药物分析 > 第十一章 体内药物分析 > 11.6 体内药物分析方法的建立与验证（一） > 体内药物分析方法的建立与验证（一）
大家好
今天我们学习体内药物分析方法验证
建立可靠的和可重复的
定量分析方法是体内药物分析的基础
对药物和制剂研发非常重要
为了保证分析方法的可靠性和可行性
生物样品分析方法在用于
实际样品的分析之前
必须对方法进行充分的方法学验证
中国药典通则收载了
《生物样品定量分析方法验证指导原则》
提供生物分析方法验证的要求
也涉及非临床或临床试验样品
实际分析的基本要求
验证的目的是证明特定方法对于测定
在某种生物基质中分析物浓度的可靠性
验证分为完整验证
部分验证和交叉验证
对于首次建立的生物样品分析方法
和新分析物的定量方法
应进行完整验证
验证时用到的基质和抗凝剂等
材料应与试验样品相同
当难于获得相同的基质时
可以采用适当基质替代
但要说明理由
在对已被验证的分析方法
进行小幅改变情况下
根据改变的实质内容
只对部分方法进行验证
即部分验证
可能的改变包括
生物分析方法从一个实验室
转移到另一个实验室
仪器改变
校正浓度范围改变 样品体积改变
换成其他基质（如血液变尿液）
或物种（如小鼠变大鼠）
改变抗凝剂 样品处理步骤 储存条件等
这些改变会对方法的可靠性
和可行性有影响时
需针对这些改变进行部分验证
并说明验证的理由
应用不同方法从一项
或多项试验获得数据
或者应用同一方法从
不同试验地点获得数据时
这些数据间的可比性
对试验结果影响很大
需要进行交叉验证来确定获得的
数据是否可靠以及它们是否具有可比性
下面我们先熟悉一下体内
样品分析方法验证中常见的术语
生物基质
一种生物来源的物质
能够以可重复的方式采集和处理
如血液、尿液等
对照标准物质
是指用于配制校正标样
和质控样品的待测物的参比物质
在结构上可以是待测物本身
也是其游离碱或酸 盐或酯
对照标准物质应该从可追溯的来源获得
应该科学论证其适用性
分析证书上应标出对照标准物质的纯度
并提供储存条件 失效日期和批号
校正标样
系指在空白生物基质中加入
已知量待测物对照标准物质
制备而得的模拟生物样品
用于建立标准曲线
计算质控（QC）样品
和试验样品中待测物的浓度
质控样品 即QC样品
其配制方法同校正标样
用于监测生物分析方法的效能
和评价每一分析批中试验样品
分析结果的完整性和正确性
校正标准和质控样品的配制方法一样
但两者的作用不同
需要互相验证
因此质控样品与校正标样
应用不同储备液来分别配制
分析批
系指在同一条件下完成的样品集合
包括试验样品 适当数量的
校正标样和QC样品的一个完整系列
试验样品
给受试者或受试动物用药后
采集到的实际样品
在建立标准曲线时
还用到空白样品和零浓度样品
用于考察干扰情况
空白样品是不含分析物
和内标的基质样品
零浓度样品是含内标的基质样品
我们重点学习色谱分析方法验证
验证的主要指标为
选择性 残留 定量下限 标准曲线
准确度 精密度 稀释可靠性
基质效应 稳定性等
选择性指分析方法区分目标分析物
和内标与基质的内源性组分
或样品中其他组分的能力
一般会在方法建立第一步进行验证
没有选择性
准确度和精密度就无从谈起
残留是指是指高浓度样品进样分析后
在随后进行的空白样品分析中
出现的分析物信号
应该在方法建立中考察残留并使之最小
定量下限是指能够被可靠定量的
样品中分析物的最低浓度
具有可接受的准确度和精密度
定量下限是标准曲线的最低点
应适用于预期的浓度和试验目的
标准曲线反映了生物样品中
待测物浓度与仪器响应值
如HPLC 峰面积的关系
一般用回归分析法所得的
回归方程来评价
标准曲线是定量计算的基础
一条具有宽的线性范围及
足够准确度和精密度的标准曲线是
对体内待测物进行准确测定的前提条件
准确度描述该方法测得值
与分析物标示浓度的接近程度
表示为
（测得值/真实值）×100%
应采用质控样品进行评价
精密度描述分析物重复测定的接近程度
定义为测量值的相对标准差（变异系数）
应使用与证明准确度相同分析
批质控样品的结果进行评价
提取回收率系指从生物基质中
回收得到待测物的响应值
与对照标准物质产生的响应值的百分比
用于评价样品预处理方法
当采用质谱方法时
应考察基质效应
基质效应是指在采用质谱为
检测器的LC-MS
或LC-MS/MS技术测定样品中
色谱分离时共洗脱的物质
改变了待测成分的离子化效率
所引起的待测物信号的降低或增加
稀释可靠性
样品稀释不应影响准确度和精密度
通过用空白基质稀释高于定量上限的
浓度样品的结果来证明稀释的可靠性
应覆盖试验样品所用的稀释倍数
稳定性
为确保测定结果的准确可靠
必须在分析方法的每一步骤确保稳定性
用于检查稳定性的条件
都应该与实际试验样品的条件相似
比如样品基质 抗凝剂 容器材料
储存和分析条件都要一致
最后用思维导图对本节内容进行小结
希望大家课后及时复习
今天的课就上到这里
下节课见
谢谢大家！
-1.1 药物分析的性质与任务
-第一章单元测试
-2.1 中国药典（一）
--中国药典（一）
-2.2 中国药典（二）
--中国药典（二）
-2.3 中国药典（三）
--中国药典（三）
-2.4 国际药品标准
--国际药品标准
-2.5 药品检验与监督
--药品检验与监督
-2.6 药品检验工作的基本程序
-2.7 药品管理规范
--药品管理规范
-第二章单元测试
-3.1 物理常数测定法-熔点
-3.2 物理常数测定法-吸收系数
-3.3 物理常数测定法-比旋度
-3.4 化学鉴别法
--化学鉴别法
-3.5 光谱鉴别法
--光谱鉴别法
-3.6 色谱鉴别法
--色谱鉴别法
-第三章单元测试
-4.1 药物中杂质的来源及分类
-4.2 杂质的限量要求与计算
-4.3 一般杂质的检查（一）
-4.4 一般杂质的检查（二）
-4.5 一般杂质的检查（三）
-4.6 一般杂质的检查（四）
-4.7 特殊杂质的检查（一）
-4.8 特殊杂质的检查（二）
-第四章单元测试
-5.1 容量分析法-酸碱滴定法
--容量分析法-概述
-5.2 容量分析法-酸碱滴定法
-5.3 容量分析法-氧化还原滴定法
-5.4 容量分析法-非水溶液滴定法
-5.5 紫外-可见分光光度法——概述
-5.6 紫外-可见分光光度法——比色法
-5.7 紫外-可见分光光度法——计算分光光度法
-5.8 高效液相色谱法（一）
-5.9 高效液相色谱法（二）
-5.10 气相色谱法
-5.11 样品的前处理方法（一）
-5.12 样品的前处理方法（二）
-5.13 药品分析方法的验证（一）
-5.14 药品分析方法的验证（二）
-第五章单元测试
-6.1 苯巴比妥及其制剂的分析
-6.2 司可巴比妥钠及其制剂的分析
-6.3 阿司匹林及其制剂的分析
-6.4 盐酸普鲁卡因及其制剂的分析
-6.5 磺胺甲噁唑及其制剂的分析
-6.6 左氧氟沙星及其制剂的分析
-6.7 异烟肼及其制剂的分析
-6.8 硝苯地平及其制剂的分析
-6.9 盐酸氯丙嗪及其制剂的分析
-6.10 盐酸麻黄碱及其制剂的分析
-6.11 硫酸阿托品及其制剂的分析
-6.12 硫酸奎宁及其制剂的分析
-6.13 地塞米松磷酸钠及其制剂的分析
-6.14 黄体酮及其制剂的分析
-6.15 维生素 B1 及其制剂的分析
-6.16 维生素 C 及其制剂的分析
-6.17 青蒿素及其制剂的分析
-6.18 青霉素钠及其制剂的分析
-6.19 头孢丙烯及其制剂的分析
-6.20 硫酸链霉素及其制剂的分析
-6.21 硫酸庆大霉素及其制剂的分析
-6.22 盐酸四环素及其制剂的分析
-第六章单元测试
-7.1 代表性辅料分析（一）
-7.2 代表性辅料分析（二）
-第七章单元测试
-8.1 制剂分析及其特点
--制剂分析及其特点
-8.2 片剂分析
--片剂分析
-8.3 注射剂分析
--注射剂分析
-8.4 复方制剂分析
--复方制剂分析
-第八章单元测试
-9.1 中药分析及其特点
--中药分析及其特点
-9.2 中药分析中样品处理方法
-9.3 中药的鉴别（一）
--中药的鉴别（一）
-9.4 中药的鉴别（二）
--中药的鉴别（二）
-9.5 中药指纹图谱与特征图谱
-9.6 中药的检查（一）
--中药的检查（一）
-9.7 中药的检查（二）
--中药的检查（二）
-9.8 中药的含量测定（一）
-9.9 中药的含量测定（二）
-第九章单元测试
-10.1 生物药物分析的特点
-10.2 生化药物分析
--生化药物分析
-10.3 生物制品分析
--生物制品分析
-第十章单元测试
-11.1 体内药物分析概述
--体内药物分析概述
-11.2 常用体内生物样品的制备与贮存
-11.3 体内生物样品分析的前处理（一）
-11.4 体内生物样品分析的前处理（二）
-11.5 体内分析方法的建立
-11.6 体内药物分析方法的建立与验证（一）
-11.7 体内药物分析方法的建立与验证（二）
-11.8 体内药物分析方法的建立与验证（三）
-第十一章单元测试
