当前课程知识点：药物分析 > 第九章 中药分析 > 9.5 中药指纹图谱与特征图谱 > 中药指纹图谱与特征图谱
大家好
今天我们学习中药指纹图谱与特征图谱
中药指纹图谱是指中药经适当处理后
采用一定的分析手段得到的
能够标示该中药特性的共有峰图谱
中药特征图谱是指中药经适当处理后
采用一定分析手段得到的能够标识
其中各种组分群特征的共有峰图谱
中国药典（2010年版）
首次收载指纹图谱与特征图谱
到2020年版中国药典
利用该技术进行评价的
中药品种从20个增加至74个
值得注意的是
特征图谱的收载数量
从2010年少于指纹图谱
到目前远远超过指纹图谱的收载品种
我们可以思考一下这背后的原因
中药指纹图谱与特征图谱的分类
按应用对象分类
指纹图谱可分为药材和饮片
植物油脂和提取物
以及制剂过程中原料药材
中间体和制剂指纹图谱
特征图谱主要分为药材和饮片
植物油脂和提取物 以及制剂特征图谱
按研究方法分类
一般分为中药化学指纹图谱或特征图谱
中药生物学指纹图谱或特征图谱
狭义的中药指纹图谱
或特征图谱一般就是中药化学图谱
一中药指纹图谱与特征图谱的分类
按测定技术分类
分为色谱法 光谱法 其他方法等
色谱法是主流方法
尤其是HPLC和GC已经成为公认的
中药指纹图谱和特征图谱常用分析技术
指纹图谱是基于图谱的整体信息
用于中药质量的整体评价
我们要让样品所包含的
主要成分在图谱中体现
满足有效信息量最大化原则
从而表征待测样品所含成分的整体性
这就是指纹图谱
第一个基本属性 整体性
指纹图谱第二个基本属性为模糊性
模糊性强调指纹图谱
与对照指纹图谱之间的相似性
而不是相同性
模糊性是由于中药多来源
化学组成复杂性与可变性等特点决定的
因此中药指纹图谱是相对“模糊”的
在此基础上建立中药
指纹图谱要求具备3个原则
系统性 特征性和稳定性
中药特征图谱是选取图谱中
某些重要的特征信息
作为控制中药质量的中药鉴别手段
因此
中药特征图谱是根据所确定的
主要成分特征峰表征待测样品
所含成分的专属性和特征性
以及稳定性
指纹图谱是一种半定量的质量评价方法
特征图谱是一种定性的质量评价方法
这样我们就可以回答刚刚提出的问题
指纹图谱和特征图谱
经过10年的发展历程
目前特征图谱收载品种超过指纹图谱
主要因其是定性方法
研究开发与应用相对更容易一些
三 中药指纹图谱与特征图谱研究思路
指纹图谱或特征图谱的建立
方案设计时需要明确研究对象
选择分析方法
首先进行样品收集
需要选择具有代表性 均一性的样品
一般为10个批次
10个批次的意义是为了
保证测试样品的代表性
每个批次样品应不少于3次检验量
实际工作中
应尽量收集多批次样品
包括不同来源 不同产地 不同采收期
不同气候条件以及不同厂家的样品
掌握所用样品的内在质量情况和规律
中间体 制剂等样品收集重点
应选择工艺稳定 疗效稳定
无不良反应的批次
留样也应不少于实验用量的3倍
建立指纹图谱或特征图谱
需要设立参照物（或参照峰）
主要用于考察方法稳定性和重现性
以确定指纹图谱的技术参数
如特征峰的相对保留时间 峰面积比等
并有助于指纹图谱的辨认
如丹参水提物指纹图谱
评价指标为
按中药色谱指纹图谱相似度评价系统
供试品指纹图谱与对照
指纹图谱经相似度计算
相似度不得低于0.90
再如 连翘提取物特征图谱
评价指标为供试品特征图谱中
应有4个特征峰
与参照物峰相应的峰为S峰
计算各特征峰与S峰的相对保留时间
其相对保留时间应在
规定值的±5%以内
指纹图谱以相似度为评价指标
特征图谱以相对保留时间
或保留时间为评价指标
接下来我们以一个中药制剂实例
介绍一下指纹图谱与特征图谱的建立
麻仁滋脾丸为中国药典收载品种
处方由大黄 火麻仁等8味药材组成
具有润肠通便 消食导滞的功效
中国药典对方中当归 枳实
厚朴酚和芍药苷要求薄层色谱鉴别
并对大黄素 大黄酚进行含量测定
本研究以炒苦杏仁中苦杏仁苷
白芍中芍药苷
麸炒枳实中橙皮苷 柚皮苷为参照物
建立HPLC指纹图谱
为麻仁滋脾丸品质评价提供基础数据
首先以苦杏仁苷 芍药苷 橙皮苷
和柚皮苷混合对照品溶液来
对供试品溶液色谱峰进行指认
方法色谱条件和色谱系统
适用性试验要求如下
方法建立过程中
首先收集6个厂家10个批次
具有代表性 均一性样品
分别考察了超声提取法 冷浸法
回流提取法等不同提取方法
最后选择超声提取法
进一步考察了超声提取法的提取时间
（30 min、45 min、60 min）
45 min时
提取较完全 色谱信息丰富
苦杏仁苷为氰苷类化合物
芍药苷为单萜类化合物
橙皮苷和柚皮苷为黄酮苷类化合物
上述化合物为亲脂性化合物
易溶于甲醇乙醇等有机溶剂中
该研究分别考察了
不同浓度的甲醇和乙醇
结果表明80%甲醇提取率最高
分离度较好
故选择80%甲醇作为提取溶剂
色谱条件选择与优化分别
考察了5种不同流动相
包括乙腈-0.1%磷酸
乙腈-0.4%磷酸
乙腈-0.6%磷酸
乙腈-水
甲醇-0.1%磷酸
结果表明
乙腈的洗脱力优于甲醇
色谱峰的数目较多
比较不同酸度对色谱峰的影响
发现使用乙腈-0.1%磷酸
作为流动相系统
色谱峰信息较多
峰形较好 峰高较高
因此选择乙腈-0.1%磷酸
作为流动相系统
选择柱温时
柱温为35 ℃时
苦杏仁苷的色谱峰峰形较差
芍药苷、柚皮苷 橙皮苷色谱峰
与相邻峰的分离度均达不到要求
柱温为30 ℃时
各组分的色谱峰与
相邻峰分离度达到要求
且色谱峰数较多、色谱峰信息丰富
故最终选择柱温为30 ℃
接下来我们进行方法学验证
精密度试验
取同一供试品溶液
按色谱条件连续进样6次
计算得到19个共有峰的相对保留时间
RSD均小于等于0.22%
相对峰面积RSD均小于等于2.50%
表明仪器精密度良好
重复性试验
取同一供试品制备供试品溶液6份
按色谱条件进行测定
以7号橙皮苷色谱峰为参照峰（S）
计算得到19个共有峰的
相对保留时间RSD
均小于等于0.04%
相对峰面积RSD
均小于等于2.93%
表明方法重复性良好
最后 指纹图谱还需要进行稳定性试验
取同一供试品溶液
按色谱条件
分别在0、3、6、9、18、24 h进样测定
以7号橙皮苷色谱峰为参照峰（S）
计算得到19个共有峰的
相对保留时间RSD均小于等于0.22%
相对峰面积RSD均小于等于2.50%
表明供试品溶液在24 h内稳定性良好
那么就可以进行指纹图谱建立和相似度评价
应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统
建立共有模式对照指纹图谱（R）
导入色谱图
设定参照图谱
设定参数
标定共有峰
这是我们建立指纹图谱的第一步
第二步进行色谱峰指认
最后
设置参照物（S）峰
一般选择与相邻的色谱峰分离较好
响应值较高且为所有样品共有的峰
作为参照物峰
该研究发现
同一厂家麻仁滋脾丸的
相似度结果相近
同一厂家产品具有一致性
但不同厂家的HPLC指纹图谱
相似度差异较大
最后用思维导图对中药指纹图谱
和特征图谱进行小结
希望大家课后及时复习
今天的课就上到这里
下次课见
谢谢大家！
-1.1 药物分析的性质与任务
-第一章单元测试
-2.1 中国药典（一）
--中国药典（一）
-2.2 中国药典（二）
--中国药典（二）
-2.3 中国药典（三）
--中国药典（三）
-2.4 国际药品标准
--国际药品标准
-2.5 药品检验与监督
--药品检验与监督
-2.6 药品检验工作的基本程序
-2.7 药品管理规范
--药品管理规范
-第二章单元测试
-3.1 物理常数测定法-熔点
-3.2 物理常数测定法-吸收系数
-3.3 物理常数测定法-比旋度
-3.4 化学鉴别法
--化学鉴别法
-3.5 光谱鉴别法
--光谱鉴别法
-3.6 色谱鉴别法
--色谱鉴别法
-第三章单元测试
-4.1 药物中杂质的来源及分类
-4.2 杂质的限量要求与计算
-4.3 一般杂质的检查（一）
-4.4 一般杂质的检查（二）
-4.5 一般杂质的检查（三）
-4.6 一般杂质的检查（四）
-4.7 特殊杂质的检查（一）
-4.8 特殊杂质的检查（二）
-第四章单元测试
-5.1 容量分析法-酸碱滴定法
--容量分析法-概述
-5.2 容量分析法-酸碱滴定法
-5.3 容量分析法-氧化还原滴定法
-5.4 容量分析法-非水溶液滴定法
-5.5 紫外-可见分光光度法——概述
-5.6 紫外-可见分光光度法——比色法
-5.7 紫外-可见分光光度法——计算分光光度法
-5.8 高效液相色谱法（一）
-5.9 高效液相色谱法（二）
-5.10 气相色谱法
-5.11 样品的前处理方法（一）
-5.12 样品的前处理方法（二）
-5.13 药品分析方法的验证（一）
-5.14 药品分析方法的验证（二）
-第五章单元测试
-6.1 苯巴比妥及其制剂的分析
-6.2 司可巴比妥钠及其制剂的分析
-6.3 阿司匹林及其制剂的分析
-6.4 盐酸普鲁卡因及其制剂的分析
-6.5 磺胺甲噁唑及其制剂的分析
-6.6 左氧氟沙星及其制剂的分析
-6.7 异烟肼及其制剂的分析
-6.8 硝苯地平及其制剂的分析
-6.9 盐酸氯丙嗪及其制剂的分析
-6.10 盐酸麻黄碱及其制剂的分析
-6.11 硫酸阿托品及其制剂的分析
-6.12 硫酸奎宁及其制剂的分析
-6.13 地塞米松磷酸钠及其制剂的分析
-6.14 黄体酮及其制剂的分析
-6.15 维生素 B1 及其制剂的分析
-6.16 维生素 C 及其制剂的分析
-6.17 青蒿素及其制剂的分析
-6.18 青霉素钠及其制剂的分析
-6.19 头孢丙烯及其制剂的分析
-6.20 硫酸链霉素及其制剂的分析
-6.21 硫酸庆大霉素及其制剂的分析
-6.22 盐酸四环素及其制剂的分析
-第六章单元测试
-7.1 代表性辅料分析（一）
-7.2 代表性辅料分析（二）
-第七章单元测试
-8.1 制剂分析及其特点
--制剂分析及其特点
-8.2 片剂分析
--片剂分析
-8.3 注射剂分析
--注射剂分析
-8.4 复方制剂分析
--复方制剂分析
-第八章单元测试
-9.1 中药分析及其特点
--中药分析及其特点
-9.2 中药分析中样品处理方法
-9.3 中药的鉴别（一）
--中药的鉴别（一）
-9.4 中药的鉴别（二）
--中药的鉴别（二）
-9.5 中药指纹图谱与特征图谱
-9.6 中药的检查（一）
--中药的检查（一）
-9.7 中药的检查（二）
--中药的检查（二）
-9.8 中药的含量测定（一）
-9.9 中药的含量测定（二）
-第九章单元测试
-10.1 生物药物分析的特点
-10.2 生化药物分析
--生化药物分析
-10.3 生物制品分析
--生物制品分析
-第十章单元测试
-11.1 体内药物分析概述
--体内药物分析概述
-11.2 常用体内生物样品的制备与贮存
-11.3 体内生物样品分析的前处理（一）
-11.4 体内生物样品分析的前处理（二）
-11.5 体内分析方法的建立
-11.6 体内药物分析方法的建立与验证（一）
-11.7 体内药物分析方法的建立与验证（二）
-11.8 体内药物分析方法的建立与验证（三）
-第十一章单元测试
