当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第二章 生命科学三大必备仪器的使用 > 第一节 移液器的设计原理和使用规范 > 移液器的设计原理和使用规范
每一位从事生命科学研究的朋友,都会面临液体转移的问题,当我们要转移大量液体而且不用定量的时候,简单粗暴的倒就可以啦!而当我们需要转移大量液体又需要定量的话,就需要用到烧杯、量筒、容量瓶等定量容器。
可是,现代生命科学研究过程中,最常操作的往往是转移小量液体,这个时候,我们最直接的就是采用滴管来完成,可是,大家想一下,用滴管完成有什么不方便之处呢?第一,用滴管不能精确定量,怎么办?第二,用滴管换液体就得洗,很累啊!
这个时候我们就要用到一个科研神器——微量手动可调移液器,就是实验室里常说的“枪”。
移液器的设计和滴管的原理相似,说到原理,我们先来想一下滴管的工作原理,我们把滴管使用的动作分解一下:第一步,按下胶头排出一定量空气;第二步,滴管伸进液体,松开胶头,胶皮回弹,滴管内气压变小,液体上移进滴管;第三步,将滴管对准另一个容器,按下胶头,挤压滴管内的液体进入新容器。
移液器在设计中也是这样的三步转移液体,不过为了便于定量,移液器采用了弹簧来实现挤压和回弹的过程,这样,我们只需要通过旋转调节钮,压缩弹簧到所需的长度,就可以精确控制每次挤压排出的空气量,从而消除了滴管使用中不能定量的弊端。
那接下来还有一个问题,滴管每次转移不同液体都要彻底清洗避免污染,移液器也要洗吗?
当然不用啦!为了实现科研工作中快速转移各种液体的需要,设计者为移液器设计了可以便捷更换的吸头,吸液体的时候,在移液器下端插入干净的吸头,所吸液体全都在吸头里,不会污染移液器。
这样,每次更换转移液体的时候,只需要打掉用过的吸头,再换一个新的就好啦!而且因为吸头成本很低,都是一次性使用的,不仅从根本上避免了滴管洗涤不净的污染问题,还免除了大家大量的洗涤工作,是不是很方便啊!
移液器是非常方便,可是不代表他十全十美啊,如果你使用不当的话,它带来的影响可是比滴管还糟糕呢!
首先,移液器每次换吸头,不用洗,是很方便,但是大家想一想,吸头和移液器不是一体的,而是每次通过按压组合在一起的,所以万一你插不紧,吸头和移液器之间有漏气,那你吸上来的液体肯定小于你设置的体积!
既然这样,我们是不是要大力的戳吸头来确保移液器和吸头之间插的紧紧的呢?
大力戳吸头的震动会损坏移液器内的精密部件,而且还不一定会让吸头完全不漏气呀!因为大力戳的时候吸头可能会在某个角度卡在移液器上,仿佛插紧了,实际还是有缝隙,就好像生活中有时候瓶盖好像拧紧了,其实只是角度不对卡住了,实际还在漏水一样。
那应该怎么办呢?
正确的做法是插吸头时垂直向下用力,旋转或前后活动一下移液器,确保吸头和移液器之间均匀贴合,这样才能最大限度上避免漏气。那是不是只要吸头插的好,转移液体就一定是准的呢!也不是哦,接下来我们就要说到第二个可能影响你吸液准确度的操作啦。
大家看吸头的样子,是上面粗,下面的吸孔很小对不对?吸孔做的小可以提高转移体积的精度,但问题是,如果吸头里面气压变化太快,液体超快速上升的时候就会像喷泉一样往上喷,很容易进入移液器内部,污染移液器。如果液体进入了移液器管道,不仅会腐蚀或损坏内部部件,造成移液不准,还可能在你下次转移其他试剂的时候造成交叉污染,影响你的实验结果!所以,我们在吸液体和排出液体的时候,就要适当控制速度,确保液体均匀稳定的上升进入吸头,或缓慢地推出吸头,这样做可以保护移液器,而且提高你的实验准确度和可信度!
除了以上讲的垂直向下用力略旋转插吸头和吸液放液慢一些之外,还有一点是要注意的:大家在转移液体的时候会发现,我们把移液体积设定好,比如900ul,按下移液器控制钮,打出900ul空气,将固定好的吸头伸入液体液面以下,缓慢松开移液器控制钮吸上来900ul液体,然后把移液器放在新容器上方,按下控制钮,打出900ul液体,这时候你会发现,吸头的尖部会残留一小部分液体,这是由于贴着吸头壁的液体下行速度略慢,就滞留在吸头里了,所以你实际转移出去的液体是比900ul要少的,这怎么办呢?这时候你需要用更大的力气继续按控制钮,是不是发现还可以再往下按一段距离?这段距离是你设定的体积之外的,就是为了让你继续把滞留在吸头尖部的液体全打出去设计的,你轻轻按控制钮到第一个好像按不动的位置称为“第一停点”,继续加大力度按到彻底按不动的位置称为“第二停点”。
所以我们每次使用移液器的时候,流程是这样的:调整体积,安装吸头,按控制钮到第一停点,吸头插入液体液面以下,匀速松开控制钮让液体进入吸头,在新容器中匀速按压控制钮,直到第二停点,打出所有液体。
好了,我们再来回忆一下移液器使用中最基本最重要的三个注意事项:
第一:插吸头要垂直向下用力,旋转或前后活动一下移液器;
第二:吸入和放出液体时要匀速,不能太快;
第三:吸液体前按控制钮到第一停点,放液体则要按到第二停点,确保液体全部打出。
熟练掌握了这三条注意事项,一般的液体定量转移你就都可以胜任啦!
此外,关于移液器的使用还有一些操作小技巧可以让你的转移精度更高,移液器的校准方法可以进一步保证你转移液体的准确度,所以,请继续学习移液器的操作要点和日常校准等内容。
-第一节 基础生物化学实验学什么?
-第二节 本课程评分标准
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-第三节 如何更好的完成本课程的学习?
-第四节 生化实验室安全注意事项
-第五节 本课程教学团队介绍
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-第六节 课前须知作业
-第一章 课前须知 作业
-第一节 移液器的设计原理和使用规范
-第二节 移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的日常校准
--移液器的日常校准
-第二章 移液器的使用 作业
--第二章 移液器的使用 作业
-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范
-第四节 分光光度计的操作要点
-第五节 分光光度法测定待测物浓度
--分光光度法的原理
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-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范
-第二章 分光光度计的使用 作业
--第二章 分光光度计的使用 作业
-第七节 离心机的设计原理和使用规范
--离心机的操作要点
--离心机的操作要点
-第二章 离心机的使用 作业
--第二章 离心机的使用 作业
-第一节 蛋白质的定量测定
-第三节 其他物质的测定
-第三章 物质的定量测定 作业
--第三章 物质的定量测定 作业
-第一节 酶活力测定的常用方法
-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定
-第三节 酶米氏常数的测定
-第四章 酶活力的测定 作业
--第四章 酶活力的测定 作业
-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术
--蛋白质的盐析提纯
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--盐析操作注意事项
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--离子交换层析
--离子交换层析
--亲和层析
--亲和层析
--IMAC亲和层析
--IMAC亲和层析
--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业
-第二节 核酸的提取和检测
--第五章 第二节 核酸的提取 作业
-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳
--核酸琼脂糖电泳-作业
-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
--SDS-PAGE的原理和操作-作业
-《基础生物化学实验》期末考试