当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第五章 物质的分离纯化 > 第二节 核酸的提取和检测 > 拟南芥叶片基因组DNA提取
同学们大家好
之前我讲解了碱裂解法制备
大肠杆菌质粒DNA
这里我将简单介绍拟南芥叶片
基因组
DNA的制备
整个过程设计4种溶液
DNA提取缓冲液
包括200mmol/L Tris-HCl pH7.4
25mmol/L 乙二胺四乙酸
0.5%SDS
还有250mmol/L NaCl
异丙醇70%乙醇
100mmol/L Tris-HCl
pH8.0缓冲液
具体操作过程如下
首先取一小片
拟南芥叶片放入1.5mL离心管中
用小研磨棒将叶片磨碎
加入400uLDNA
提取缓冲液
继续研磨均匀
三个步骤如视频所示
13,000rpm 离心10分钟
转移上清液至新的1.5mL
离心管中
加入400uL异丙醇
振荡如视频所示
-20℃静置4分钟
以沉淀DNA
将离心管放入离心机
13,000rpm 离心10分钟
沉淀如图片1 所示
弃上清液
加入1mL70%的乙醇洗涤
沉淀再次13,000rpm
离心10分钟
弃上清 保留沉淀
如图3 箭头所示
室温晾干沉淀大约15分钟
之后加入Tris-HClpH8.0
的缓冲液
溶解DNA
-20℃ 保存备用
让我们小结拟南芥叶片基因组
DNA的制备流程
大家是否觉得这个实验似乎
比提取质粒更简单
其实有关植物基因组DNA
的提取方法有很多
也有比较复杂的方法
但是需要提醒的是
采用什么样的方法是依据于
植物材料的特性和制备好
的DNA使用目的而定的
现在的方法对于以拟南芥
叶片为材料提取DNA
用于多聚酶链式反应
是比较简洁和易操作的
在今后的研究中
可以根据实验材料和实验目的
选择不同的实验方法
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