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SDS-PAGE电泳凝胶的染色资料文件与下载

SDS-PAGE电泳凝胶的染色

同学们好,上节课我们学习了SDS-PAGE的原理以及操作方法。电泳结束后,蛋白质条带用肉眼是看不到的,需要通过染色的方法才能显现出来,从而检测它们的大小、纯度和含量。蛋白质的染色液和染色方法都有哪些呢?这节课,我们就来学习SDS-PAGE电泳凝胶的染色。

电泳后有不同的染色方法,所用染色液的原理和灵敏度各不相同。实验室常用的蛋白质染色方法有考马斯亮蓝染色法以及银染法,我们称之为传统染色法。在传统染色法基础上也产生了一些改进的快速染色法,使染色更为方便、快速。蛋白质也可以采用荧光染色的方法,这种方法在蛋白质组学研究中使用较多。

考马斯亮蓝染色法是SDS-PAGE电泳后蛋白质染色最常用的方法。使用的染料是考马斯亮蓝R-250。考马斯亮蓝R-250中文名称是三苯基甲烷,能渗入凝胶,与蛋白质的碱性基团非共价结合,使蛋白质条带呈现蓝色。染料的结合量和蛋白质的量呈正比,因此可以测定蛋白质的含量。考马斯亮蓝检测的灵敏可达到10 ng。

考马斯亮蓝染色法需要染色液和脱色液。染色液对蛋白质条带进行固定和染色,染色液也会与凝胶以低亲和力结合,因此需要脱色液将凝胶背景处的染料去除,使蛋白质条带能清晰显示出来。

SDS-PAGE电泳结束后,取出凝胶,切去溴酚蓝前沿和浓缩胶后,将凝胶放入染色液中,放置在摇床上染色30 min以上,然后倒出染色液,染色液可以回收使用几次。凝胶用清水漂洗一次后,放入装有脱色液的容器中,摇床震荡脱色,到蛋白质条带清晰的时候就可以停止脱色了。脱色期间,需要更换3至4次脱色液。

实验室常用的另一种传统染色法是银染法,银染的方法很多,染色机制还不是很明确。可能是由染色液中的银离子与氨基酸侧链基团结合,随后,蛋白质条带上结合的银离子被还原为金属银,沉积在蛋白质条带上显色。银染法的灵敏度比考马斯亮蓝染色法高100倍以上,可检测低至0.1 ng的蛋白质条带。

与考马斯亮蓝染色法相比,银染操作步骤多,染色时间长。因为银染具有不同的染色方法,这里就不详细介绍染色过程了。感兴趣的同学们可以在实验指南上查找到银染的方法,选择省时、高效的银染方法。

为了提高染色的效率和效果,研究者也在不断对染色方法进行改进,通过改变染色液的成分提高染色的灵敏度,或者是在染色和脱色的过程中加热来缩短染色和脱色的时间。这里提供的就是一份通过微波炉加快染色和脱色过程的方案,可在半小时左右完成染色和脱色,与传统染色法数小时相比,大大缩短了染色的时间。现在各个公司也提供一些改良的考马斯亮蓝快速染色的试剂,同学们也可以选择使用。

蛋白质染色还可以采用荧光染色法,在蛋白质组学研究中应用比较多。荧光染料种类很多,不同染料原理及操作有所不同。它综合了考染法和银染法的优点,灵敏度与银染相当,可检测低至0.25 ng或1 ng左右的蛋白质条带,但是操作流程比银染简单。与考染和银染一样,荧光染色通常在电泳后进行,需要固定和脱色。凝胶用成像系统进行观察和拍照。

通过本节课的学习,我们了解了SDS-PAGE凝胶染色的传统方法,包括考染法和银染法,以及改进的快速染色法和荧光染色法,同学们可根据实验的要求和实验条件选择经济、高效的染色方法

 


下一节:利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

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基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

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--蛋白质的盐析提纯

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--盐析操作注意事项

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--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

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--离子交换层析

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--亲和层析

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--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

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--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

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--IMAC亲和层析

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--IMAC亲和层析技术的基本步骤

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--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

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--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

SDS-PAGE电泳凝胶的染色笔记与讨论

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