当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第三章 物质的定量测定 > 第一节 蛋白质的定量测定 > Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导
一、 实验试剂
1. 标准蛋白质溶液:0.25 mg/ml牛血清白蛋白溶液。
准确称取烘干恒重的牛血清白蛋白0.25 g,加入约800 ml纯水,搅拌溶解后定容到1 L。
2. 试剂甲:
试剂甲A液:10 g Na2CO3,2 g NaOH和0.5 g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O),加入约400 ml纯水,搅拌溶解后定容到500 ml。
试剂甲B液:0.5 g CuSO4·5H2O溶解后,用纯水定容至100 ml。
每次使用前将A液:B液=50:1的比例混合,即为试剂甲,使用前配制,过期失效。
3. 试剂乙:
试剂乙配制方法复杂,一般直接采购,最常用的采购自Sigma公司,货号F9252。
二、 实验器材
移液器、可见分光光度计(含比色杯)
三、 实验步骤
1. 按照如下表格,用纯水和标准蛋白质溶液配制标准曲线,并加入待测液各1 ml,然后每支试管中各加入5 ml Folin酚试剂甲,室温(20-25℃)放置10 min,在每支试管中各加入0.5 ml Folin酚试剂乙,每支试管加入试剂乙后立即混匀,室温放置30 min,在650 nm下测定各管吸光度。
2. 测定结束,计算待测液浓度。
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