当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第六章 利用电泳对生物大分子进行检测 > 第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 > 利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量
同学们好
我们已经学习了实验室常用的
SDS-PAGE电泳的原理
以及操作SDS-PAGE电泳
在实验室应用非常广泛
其中一个主要的应用就是
测定蛋白质的分子质量
SDS-PAGE测定蛋白质
分子质量的原理是什么
具体又是怎样操作的呢
这节课我们就来学习SDS-PAGE
测定蛋白质分子质量的方法
用SDS-PAGE测定蛋白质分子质量时
蛋白质样品需要经过
样品裂解液的处理
样品裂解液中含有SDS和还原剂
β-巯基乙醇或二硫苏糖醇
也就是我们所说的DTT
处理后的蛋白质解离为单肽链
成为带有大量负电荷长椭圆棒
状的SDS蛋白质复合物
在电场中迁移率不受原有
电荷和形状的影响
至于椭圆棒的长度即蛋白质
分子质量有关
电泳过程中
蛋白质根据分子量进行分离
通过染色我们可以看到
一条条的蛋白质条带
怎样根据图片分析某个未知
蛋白质的分子质量
1969年
研究者对37种蛋白质分子质量与
迁移率之间的关系进行了研究
实验 证实
当蛋白质相对分子质量在
15KD到200KD的范围内
电泳迁移率与分子质量
的对数呈线性关系
蛋白质条带的迁移率是可以
从电泳图片上测量得到的
再根据迁移率与相对分子
质量的对数之间的关系
就可以计算出蛋白质的分子质量了
通常以相对迁移率计算
蛋白质的迁移率
电泳时我们需要将一系列分子
量已知的蛋白质分子量标准
与待测样品在同一块胶上进行电泳
电泳结束后
量出每一条蛋白质条带的迁移距离
和电泳指示剂溴酚蓝的迁移距离
也就是从加样孔到蛋白质条带
或溴酚蓝条带中央的距离
根据蛋白质条带的迁移距离除以
溴酚蓝前沿的牵引距离
我们就可以计算出每一种
蛋白质的相对迁移率了
用蛋白质分子量标准中的每一种
蛋白质分子质量的对数为纵坐标
相对迁移率为横坐标作图
得到一条标准曲线
根据待测蛋白质的迁移距离
计算出相对迁移率
就可以从标准曲线中查得
蛋白质的分子质量了
除了刚才我们提到的
根据相对迁移率计算待测蛋白质
分子质量的方法外
我们还可以通过比较待测蛋白质与
蛋白质分子量标准的相对位置
估计待测蛋白质的近似分子质量
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-第五节 本课程教学团队介绍
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-第二节 移液器的操作要点
--移液器的操作要点
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--移液器的日常校准
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-第二章 移液器的使用 作业
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-第五节 分光光度法测定待测物浓度
--分光光度法的原理
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-第二章 分光光度计的使用 作业
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-第七节 离心机的设计原理和使用规范
--离心机的操作要点
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-第二章 离心机的使用 作业
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-第三章 物质的定量测定 作业
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-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定
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-第四章 酶活力的测定 作业
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--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业
-第二节 核酸的提取和检测
--第五章 第二节 核酸的提取 作业
-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳
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-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
--SDS-PAGE的原理和操作-作业
-《基础生物化学实验》期末考试