当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第三章 物质的定量测定 > 第一节 蛋白质的定量测定 > 双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导
双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导
一、 实验试剂
1. 标准蛋白质溶液:10 mg/ml牛血清白蛋白溶液。
准确称取烘干恒重的牛血清白蛋白1 g,加入约80 ml纯水,搅拌溶解后定容到100 ml。
2. 双缩脲试剂:
称取1.5 g CuSO4·5H2O、6 g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O),溶解在500 ml纯水中,搅拌加入300 ml 10%的NaOH溶液,定容到1 L,避光保存。
此试剂中还可以加入1 g碘化钾(KI)防止铜离子自动还原形成氧化亚铜。
提示:所用纯水应煮沸除去CO2并冷却后使用。
二、 实验器材
移液器、可见分光光度计(含比色杯)
三、 实验步骤
1. 按照如下表格,用纯水和标准蛋白质溶液配制标准曲线,并加入待测液各1 ml,然后每支试管中各加入4 ml双缩脲试剂,室温(20-25℃)放置30 min使反应完全,在540 nm下测定各管吸光度。
2. 测定结束,计算待测液浓度。
-第一节 基础生物化学实验学什么?
-第二节 本课程评分标准
--本课程评分标准
-第三节 如何更好的完成本课程的学习?
-第四节 生化实验室安全注意事项
-第五节 本课程教学团队介绍
--本课程团队介绍
-第六节 课前须知作业
-第一章 课前须知 作业
-第一节 移液器的设计原理和使用规范
-第二节 移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的日常校准
--移液器的日常校准
-第二章 移液器的使用 作业
--第二章 移液器的使用 作业
-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范
-第四节 分光光度计的操作要点
-第五节 分光光度法测定待测物浓度
--分光光度法的原理
--分光光度法的原理
-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范
-第二章 分光光度计的使用 作业
--第二章 分光光度计的使用 作业
-第七节 离心机的设计原理和使用规范
--离心机的操作要点
--离心机的操作要点
-第二章 离心机的使用 作业
--第二章 离心机的使用 作业
-第一节 蛋白质的定量测定
-第三节 其他物质的测定
-第三章 物质的定量测定 作业
--第三章 物质的定量测定 作业
-第一节 酶活力测定的常用方法
-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定
-第三节 酶米氏常数的测定
-第四章 酶活力的测定 作业
--第四章 酶活力的测定 作业
-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术
--蛋白质的盐析提纯
--蛋白质的盐析提纯
--盐析操作注意事项
--盐析操作注意事项
--离子交换层析
--离子交换层析
--亲和层析
--亲和层析
--IMAC亲和层析
--IMAC亲和层析
--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业
-第二节 核酸的提取和检测
--第五章 第二节 核酸的提取 作业
-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳
--核酸琼脂糖电泳-作业
-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
--SDS-PAGE的原理和操作-作业
-《基础生物化学实验》期末考试