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菠萝蛋白酶活力的计算（Folin酚法）

我们在经过酶反应和酪氨酸测定后，会得到一系列的680 nm波长下的吸光度值：

酶活力计算1.png

并通过Bradford法测定了菠萝蛋白酶溶液中的蛋白质浓度，也得到一系列吸光度值：

酶活力计算2.png

接下来，我们看看，如何利用这些数据来计算菠萝蛋白酶的比活力（U/mg）。

首先我们需要计算出0.5 ml标准曲线体系中的酪氨酸浓度：

酶活力计算3.png

以酪氨酸浓度为横坐标，以680 nm吸光度值为纵坐标，来绘制酪氨酸标准曲线，

酶活力计算4.png

计算三支酶测定管吸光度值的平均值，（0.467+0.483+0.476）/ 3 = 0.475

将测定管吸光度值减去对照管吸光度值：
0.475-0.05 = 0.425
然后通过拟合方程计算此吸光度值对应的酪氨酸浓度：
酶促反应时间中生成酪氨酸浓度=(0.425-0.001)/6.86=0.0618 mg/ml，

这是酶促反应时间10分钟内生成的酪氨酸在体系中的浓度，所以我们用这个浓度乘以体系的体积，就可以知道体系中有多少μg酪氨酸。那么这个体系的体积应该是多少呢？我们需要来回顾一下酶学部分的实验过程。
每管体系中含有0.5 ml缓冲液，0.5 ml酶液，1 ml酪蛋白溶液和1 ml三氯乙酸溶液，总共是3 ml。

酶活力计算5.png

这里同学们可能会问，为什么要加上三氯乙酸呢？这时候不是没有酶反应了吗？为什么不是只包含缓冲液、酶和酪蛋白溶液呢？
请注意，各位同学在做酶学计算的时候一定要注意区分反应体系和测定体系。我们测定的酪氨酸浓度是在加入三氯乙酸后的上清中，所以此时的浓度应该是加入三氯乙酸后的3 ml体系中的浓度，我们用此浓度乘以3 ml的体积，就可以知道整个体系中的生成多少μg酪氨酸，即0.0618 mg/ml × 3 ml = 0.185 mg = 185 μg。

到此为止，我们计算出10分钟酶反应时间中生成了185 μg酪氨酸，而我们对菠萝蛋白酶酶活力的规定是：每分钟水解酪蛋白生成1 ug酪氨酸的酶量为1个活力单位（U），因此，每管酶反应体系中的酶活力单位就等于酪氨酸的量除以10 min，185÷10=18.5 U。
这些活力单位是我们在测定过程中加入体系的0.5 ml酶液的活力单位，所以可以计算出每ml酶液中的活力单位，即18.5 U ÷ 0.5 ml = 37 U/ml，这就是酶液中的活力单位。

接下来我们继续计算菠萝蛋白酶的比活力，这需要测定和计算此溶液中的蛋白质浓度，我们采用的是Bradford法，以下是实验数据

酶活力计算6.png

我们同样需要先计算一系列标准曲线的蛋白质浓度，

酶活力计算7.png

然后以蛋白质浓度为横坐标，以595nm吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线

酶活力计算8.png

计算三支样品管吸光度值的平均值，（0.341+0.356+0.350）/ 3 = 0.349
通过拟合方程计算样品管中蛋白质的浓度：（0.349+0.0135）/ 2.7869 = 0.13 mg/ml
也就是酶溶液的蛋白质浓度为0.13 mg/ml

最后一步，计算此菠萝蛋白酶的比活力，比活力的单位是每g蛋白中含有的酶活力单位数（U/g），所以我们用前面计算出的酶液中的酶活力含量37 U/ml除以蛋白质浓度0.13 mg/ml，37 U/ml ÷ 0.13 mg/ml = 285.385 U/mg

再将此数值乘以1000，换算成每g蛋白中的酶活力单位，
285.385 U/mg × 1000 = 285385 U/g，即可计算出此菠萝蛋白酶的比活力285385 U/g。

这就是酶活力和比活力的计算方法，同学们在实际计算过程中，注意思考每一步计算的意义，掌握酶活力测定和计算的思路，就可以顺利完成所有酶活力的测定实验了。

下一节:淀粉酶米氏常数的测定和计算

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第一章课前须知

-第一节基础生物化学实验学什么？

--《生物化学实验》学什么？

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-第二节本课程评分标准

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-第三节如何更好的完成本课程的学习？

--不同需求的同学如何学习本课程？

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-第四节生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

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-第六节课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章课前须知作业

第二章生命科学三大必备仪器的使用

-第一节移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

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--移液器的日常校准

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--移液器的操作中易错点

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--Eppendorf移液器操作手册

-第二章移液器的使用作业

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--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

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-第四节分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

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--分光光度计的操作要点

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-第五节分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

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--分光光度法测定物质浓度的实验设计

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-第六节荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

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-第二章分光光度计的使用作业

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-第七节离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

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--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章离心机的使用作业

--第二章离心机的使用作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章物质的定量测定

-第一节蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

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--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

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--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

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--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

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--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

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--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

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--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

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--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

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-第三节其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

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-第三章物质的定量测定作业

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-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗？

第四章酶活力的测定

-第一节酶活力测定的常用方法

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-第二节菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作（Folin酚法）

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--菠萝蛋白酶比活力的测定（Folin酚法）

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--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导（Folin酚法）

--菠萝蛋白酶活力的计算（Folin酚法）

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-第三节酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

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--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作（Folin酚法）

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--菠萝蛋白酶米氏常数的计算（Folin酚法）

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-第四章酶活力的测定作业

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-查阅一个你感兴趣的酶，想想怎么测？

第五章物质的分离纯化

-第一节蛋白质分离纯化的常见技术

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--第五章第二节核酸的提取作业

-你想得到什么分子，如何纯化呢？

第六章利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节核酸琼脂糖凝胶电泳

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--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节聚丙烯酰胺凝胶电泳

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--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

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--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

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--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳，还有什么用于生物大分子鉴定的方法？

第七章期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

菠萝蛋白酶活力的计算（Folin酚法）笔记与讨论

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